ELISA试验 CMA CNAS检测报告
来源:健明迪检测
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健明迪检测提供的ELISA试验,ELISA(酶联免疫吸附测定)是一种广泛应用的免疫学检测技术,主要用于检测样本中的抗原或抗体,报告具有CMA,CNAS认证资质。
ELISA(酶联免疫吸附测定)是一种广泛应用的免疫学检测技术,主要用于检测样本中的抗原或抗体。其基本原理是利用抗原-抗体特异性结合的原理,通过酶标记的抗体与固相载体上的抗原或抗体发生反应,再与底物反应生成有色物质,最后通过比色法或其他方法定量分析该有色物质的含量,从而实现对样本中特定抗原或抗体的定性和定量检测。
在实际应用中,ELISA试验广泛用于疾病诊断(如HIV、乙肝、梅毒等传染病检测),食品和环境样品中的有害物质检测,以及生物医学研究等多个领域。
检测标准
ELISA(酶联免疫吸附测定)试验是一种广泛应用的免疫学检测方法,主要用于检测血清、细胞培养上清或其他生物样本中的抗原或抗体。标准的ELISA试验流程通常包括以下几个步骤:
1. **包被(Coating)**:将待测抗原或抗体固定在96孔酶标板的内壁上,一般过夜4℃包被。
2. **封闭(Blocking)**:加入非特异性蛋白质如牛血清白蛋白或酪蛋白溶液,以封闭未结合位点,减少非特异性结合。
3. **加样(Sample Addition)**:加入待测样品和一系列已知浓度的标准品,使其与固相上的抗原或抗体进行反应。
4. **孵育(Incubation)**:分别在适宜温度下孵育一段时间,使样本或标准品中的抗原与抗体充分结合。
5. **洗涤(Washing)**:通过多次洗涤去除未结合的物质。
6. **结合酶标记物(Addition of Enzyme-Conjugated Antibody)**:加入与第二抗体(针对第一步中抗原或抗体的抗体)偶联的酶,如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)。
7. **再次孵育和洗涤**:与上述步骤类似,孵育后需经过数次洗涤。
8. **底物显色(Substrate Development)**:加入相应酶的底物,如TMB或BCIP/NBT,酶催化底物产生颜色反应。
9. **终止反应(Stop Solution)**:当颜色反应达到适当强度时,加入终止液终止酶促反应。
10. **读取结果(Reading Results)**:在特定波长下用酶标仪测定各孔吸光度值,并根据标准曲线计算出待测样品中抗原或抗体的浓度。
以上即为标准ELISA试验的基本流程,具体操作可能会因不同的实验目的和试剂盒有所差异,应参照试剂盒说明书进行操作。
检测流程
ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种常用的检测和定量生物样本中特定蛋白或其他大分子物质的免疫学方法,通常由专业的实验室或检测机构进行。以下是基本的ELISA试验流程:
1. 样本准备:
收集待测样本,可能是血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆液等。
按照说明书要求对样本进行预处理,如离心、稀释等。
2. 试剂与板子准备:
取出ELISA试剂盒,按照说明书中指示解冻并平衡至室温。
在微孔板(96孔板或48孔板)中预先包被好特异性抗体。
3. 封闭与加样:
使用封闭液填充各孔以减少非特异性结合,然后孵育一段时间。
倒去封闭液后,将待测样本以及阴性对照、阳性对照加入对应的微孔中,再次孵育。
4. 结合反应:
加入生物素标记的二抗或直接加入HRP标记的抗体,使其与样本中的靶标抗原结合。
5. 清洗与显色:
通过多次洗涤去除未结合的抗体,确保仅保留与靶标结合的抗体-酶复合物。
添加酶底物溶液(例如TMB),在酶的作用下产生颜色反应。
6. 终止反应与读数:
当达到合适的显色时间后,添加终止液停止酶促反应,使颜色稳定。
使用酶标仪在特定波长下测定各孔的吸光度值。
7. 数据分析:
根据标准曲线计算各样本中目标蛋白的浓度。
对结果进行统计分析,并出具检测报告。
以上步骤可能因不同厂家的试剂盒而略有差异,请务必参照具体试剂盒的操作手册进行实验。