CCK-8实验-肿瘤药敏试验
来源:健明迪检测
公司简介
健明迪检测提供的CCK-8实验-肿瘤药敏试验,CCK-8(CellCountingKit-8)实验是一种广泛应用于细胞增殖和毒性检测的生物化学方法,在肿瘤药敏试验中,报告具有CMA,CNAS认证资质。
CCK-8(Cell Counting Kit-8)实验是一种广泛应用于细胞增殖和毒性检测的生物化学方法,在肿瘤药敏试验中,它主要用于评估抗肿瘤药物对肿瘤细胞生长抑制的效果。
肿瘤药敏试验是通过将不同浓度的抗肿瘤药物作用于肿瘤细胞,然后利用CCK-8试剂检测各组细胞在药物作用后的活性。CCK-8中含有可以被活细胞代谢的WST-8染料,活细胞内的脱氢酶会将其转化为水溶性的橙黄色产物,其颜色深浅与活细胞的数量成正比。因此,通过测量吸光度值的变化,可以定量分析各种药物浓度下肿瘤细胞的存活率和生长抑制率,从而评价肿瘤细胞对特定药物的敏感性,为临床个性化用药提供科学依据。
检测标准
CCK-8(Cell Counting Kit-8)实验是一种广泛应用于细胞增殖和毒性检测的实验方法,在肿瘤药敏试验中,主要用于评估药物对肿瘤细胞生长抑制的效果。其标准步骤大致如下:
1. 细胞准备:首先,将待测的肿瘤细胞以适当的浓度接种在96孔板中,每个孔内细胞数量保持一致。
2. 药物处理:孵育一定时间后(如24小时),按照预设的药物浓度梯度向各孔加入药物溶液,同时设立对照组(不加药物)。
3. 孵育:将添加药物后的细胞继续在适宜条件下孵育一段时间(如48或72小时),让药物与细胞充分作用。
4. 加入CCK-8试剂:孵育结束后,每孔加入适量的CCK-8溶液,然后再次孵育2-4小时。
5. 测定吸光度:使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度值。
6. 数据分析:通过对比不同药物浓度下的吸光度与对照组之间的差异,计算出药物对肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50值),以此评估药物对肿瘤细胞的敏感性。
注意:具体的实验条件(如细胞种类、药物浓度范围、孵育时间等)需根据实际研究需求进行调整。同时,为了保证结果的准确性,实验需设置足够的重复孔,并遵循良好的实验室操作规范。
检测流程
CCK-8(Cell Counting Kit-8)实验是一种广泛应用于细胞增殖和毒性检测的生物化学方法,其在肿瘤药敏试验中的流程一般如下:
1. 细胞准备:
选取待测的肿瘤细胞系,按照常规方法进行培养,并调整细胞浓度至适宜的密度(如5000-10000个/孔)。
将细胞接种到96孔板中,每孔加入一定体积(如100μL)的完全培养基。
2. 药物处理:
设立对照组(仅含细胞和培养基),并设立多个药物浓度梯度组(根据药物特性及预期效果,设置至少5个以上浓度)。
向各药物浓度组分别加入不同浓度的抗肿瘤药物溶液,每个浓度重复3-6孔以减少误差。
3. 孵育:
将处理好的96孔板放入细胞培养箱中,在适宜的条件下(如37℃,5% CO2)孵育一段时间(通常为24-72小时,根据细胞生长速度和药物作用时间确定)。
4. CCK-8试剂加入与孵育:
移除各孔内的旧培养基,向每孔加入含有CCK-8试剂的新鲜培养基(一般按10%的比例加入,如100μL培养基中加入10μL CCK-8试剂)。
再次将96孔板放回细胞培养箱中孵育1-4小时(具体时间参照试剂盒说明)。
5. 测定OD值:
取出96孔板,使用酶标仪在450nm或推荐波长处测定各孔的吸光度(OD值)。
6. 数据分析:
根据对照组和药物处理组的OD值计算细胞存活率或抑制率,绘制剂量-反应曲线(浓度-效应曲线)。
通过曲线分析确定半数抑制浓度(IC50值),评价药物对特定肿瘤细胞的敏感性。
以上就是CCK-8实验-肿瘤药敏试验的基本流程。具体的步骤可能需要根据实际操作环境、细胞类型和药物性质等因素进行微调。