食品中微生物检测方法有哪些  深圳食品类微生物检测 健明迪

一、目的：

本规程旨在为微生物实验室操作提供一个规范化规程；

二、适用范围：

微生物实验室；

三、责任人：

实验室、微生物检测员；

四、平安留意事项：

严厉遵照无菌操作，防止微生物污染;操作人员进入微生物实验室应先关掉紫外灯。

五、微生物实验室规范化操作规程：

1.微生物实验室应设有无菌操作间缓和冲间，无菌操作间洁净度应到达10000级，室内温度坚持在20-24℃，湿度坚持在45-60%，超净台洁净度应到达100级。

2.微生物实验室应坚持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

3.严防一切灭菌器材和培育基污染，已污染者应中止运用。

4.微生物实验室应备有任务浓度的消毒液(75％的酒精)。

5.微生物实验室应活期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证微生物实验室的洁净度契合要求。

6.需求带入微生物实验室运用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

7.任务人员进入微生物实验室前，必需用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间改换公用任务服，鞋，帽子，口罩和手套(用75%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入微生物实验室停止操作。

8.微生物实验室运用前必需翻开微生物实验室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时翻开超净台停止吹风。操作终了，应及时清算微生物实验室，再用紫外灯辐照灭菌30分钟。

9.供试品在反省前，应坚持外包装完整，不得开启，以防污染。反省前，用75%的酒精棉球消毒外表面。

10.每次操作进程中，均应做空白对照，以反省无菌操作的牢靠性。

11.吸取菌液时，必需用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

12.接种针每次运用前后，必需经过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培育物。

13.带有菌液的吸管，试管，培育皿于高压蒸汽灭菌锅121℃坚持20min后取出清洗。

14.如有菌液洒在桌上或地上，应立刻用75%酒精溶液覆在被污染处至少30分钟，再做处置。任务衣帽等遭到菌液污染时，应立刻脱去，高压蒸汽灭菌后洗濯。

15.凡带有活菌的物品，必需经消毒后，才干在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。

16.微生物实验室应每月反省菌落数。在超净任务台开启的形状下，取内径90mm的无菌培育皿若干，无菌操作区分注入消融并冷却至约45℃的营养琼脂培育基约15mL，放至凝结后，倒置于30-35℃培育箱培育48小时，证明无菌后，取平板3-5个，区分放置任务位置的左中右等处，开盖表露30分钟后，倒置于30-35℃培育箱培育48小时，取出反省。100级洁净区平板杂菌数平均不得超越1个菌落，10000级洁净室平均不得超越3个菌落。如超越限制，应对微生物实验室停止彻底消毒，直至重复反省契合要求为止。

如需了解2020年药品 微生物、洁净间、实验室、计算机、数据完整性、注册等

器械 无菌检验员、内审、灭菌、厂房验证、管代、法规等课程和内训均可联络。

食品类微生物检测：

食品类微生物检测详细是指细菌学检验，包括细菌病毒总数、大肠杆菌和病原体的检验。经典的方法有固体细胞培育液法（用于细菌病毒总数的检验），液体细胞培育液发酵法（用于大肠杆菌的检验）效劳范围：

各种食品类，植物性、植物性原辅资料、消费加工产品、半消费加工产品，如粮食、油脂、调味料、肉食品、饮料、罐头、饼干、糖果类、酒水饮料、蔬菜、炒货、食用添加剂、农产品、儿童食品、豆制品、点心等。

菌落总数：

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测菌落总数测定 GB 4789.2-2016.

大肠杆菌计数：

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测大肠杆菌计数 GB 4789.3-2016.

沙门氏菌：

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测沙门氏菌检测 GB 4789.4-2016 （不测血细胞分型）。

志贺氏菌：

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测 志贺氏菌检测 GB 4789.5-2012.

副溶血性弧菌：

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测副溶血性弧菌检测 GB 4789.7-2013 （不测血细胞分型）。

金黄色葡萄球菌 :

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测金黄色葡萄球菌检测 GB 4789.10-2016.

溶血性链球菌：

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测 β型溶血性链球菌检测GB4789.11-2014.

蜡状芽孢杆菌 :

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测 蜡样芽孢杆菌检测 GB 4789.14-2014.

霉菌和酵母计数 :

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测 霉菌和酵母计数 GB 4789.15-2016.

单核细胞增生李斯特氏菌 :

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测单核细胞增生李斯特氏菌检测 GB 4789.30-2016.

乳酸菌 :

食品卫生平安规范规则: 食品类微生物学检测乳酸菌检测 GB 4789.35-2016.

大肠埃希氏菌计数 :

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测 大肠埃希氏菌计数 GB 4789.38-2012.

大肠埃希氏菌O157:H7/NM :

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测大肠埃希氏菌O157:H7/NM检测 GB 4789.36-2016.

调料检测 :

食品卫生平安微生物学检测 调料检测 GB/T 4789.22-2003.

糖果、点心、果脯加工检测 :

食品卫生平安微生物学检测 糖果、点心、蜜饯检测 GB/T 4789.24-2003.

酒类检测 :

食品卫生平安微生物学检测 酒类检测 GB/T 4789.25-2003.

商业效劳无菌 :

食品卫生平安规范规则:食品类微生物学检测 商业效劳无菌检测 GB 4789.26-2013 不做附则B异常状况说明。

一、什么是才干验证 实验室才干验证，深刻地讲，就是评价一个实验室有无展开某项检验检测活动、出具合法有效的检验检测报告的才干。才干验证的目的是保证明验室的运转满足质量管理的要求，出具的结果公允公正、合法有效。 才干验证要从两个方面来入手： *，硬件：能否具有与所要从事的检验检测活动相婚配的场地、人员、设备。 第二，软件：人员的才干能否满足要求，实验室的管理运转能否满足要求。

二、实验室收到盲样菌株标本后 1、操作前细心阅读参指点书，尤其小的备注要留意，很多特殊状况的处置大都在备注里。 2、样品接纳前的反省很重要，首先对样品的完整性停止反省，对信息的阅读要片面，假设发现样品有效果及时沟通，这样要比做样品的时分在发现来的要及时，能节省不少的时间； 3、作业指点书的阅读要到位，很多才干验证样品寄到后要跟一份作业指点书，作业指点书中往往会对本次才干验证的样品、成分、尺寸、选择方法、样品的结果记载、包括修约或样品的粘贴、样品寄发的留意事项等有明白的规则，熟读这些对实验预备有很好的作用。比如有的会要求将实验后样品一块寄发组织单位，有的实验室假设不细心阅读的话很容易将测试后样品立刻处置掉，假设寄样时在看见可就完了。 4、测试前的预备任务一定要做好，包括设备的校准、试运转等，有条件的状况下可以在正式测试前选择一块相仿的样品停止一下预测试，这样会将测试进程中的效果提早发现提早处置。对正式测试的操作有协助。

三、才干验证样品处置 1、样品测试进程中的判别才干很重要，有时分我们在测试中往往会自以为是，为了保证测试进程中的准确操作*好是找一个阅历丰厚的作督察，发现效果及时处置，假设等操作终了再发现效果的话能够会由于样品的消耗而无法验证结果； 2、定量项目，西林瓶内样品不可联系，应全部用于检测。普通参考书指点的是加40mL稀释液制成40mL样品。 3、定量项目样品稀释。指点书标明了稀释范围的，在稀释范围左右各加1个稀释度停止；书上没有稀释范围的，多做稀释倍数，选择适宜的稀释倍数计数（普通可稀释至10-8）。 4、定量项目，除了要多做稀释倍数外，同时同一稀释度要多倒几皿，从原理下去讲，检测进程属于随机抽样反省，平板越多，数据越接近真值。思索性价比，又不能够不时疯狂一个稀释度很多平板，所以才干验证时分多倒几皿，求好结果。 5、定性项目有一些重要步骤。 a、增菌及分别步骤尤其重要。选择适宜的增菌液和分别用培育基对目的菌的检出十分关键，选择两种以上的增菌液和分别用培育基对菌株作直接分别和增菌后分别。 b、划线分别十分重要，要把增菌液中的目的菌尽量多的表达出来，要分出单个菌落并尽能够多挑取可疑菌落，确保分别到目的菌。 c、生化实验和血清学实验以营养琼脂平板上的纯培育细菌为好。

四、实验进程一定要做阴阳对照 阳性对照，是在试知验中，检验培育基和培育条件能否适宜，假设在实验中，阳性实验没有生长的话，那这个实验是失败的。阴性对照主道要是检测培育基能否污染，在没有参与任何东西培育时，培育基培育后还是会显示阳性回结果，这就说明培育基灭菌不彻底，染菌答了，这样也会影响实验结果的。

五、培育基方面需求留意的中央 1、培育基配制充沛混匀后再灭菌。 正确做法是用一局部水搅拌平均后，再参与剩余水量，混匀后灭菌或分装。 2、混菌法倒皿要充沛混匀。 培育基倒完要左5圈右5圈（混匀速度一定要慢，目的是——防止培育基动摇到二皿接触的缝隙局部形成后续污染），找较水平位置冷却凝结。 3、培育基要不要掩盖效果。 掩盖的目的是为了阻止活菌在培育基表层经过鞭毛移动，形成片状生长，无法计数这一不利现象的发作。这里可以发扬客观能动性-关于不运动的菌，可以不掩盖，关于运动的菌掩盖。 总结一下： a临时检测同一种样品，不掩盖并无蔓延现象，不掩盖；临时检测蔓延选择了掩盖，不时掩盖。 b未知样品，停止掩盖和不掩盖的比对实验，然后决议以后异样的样品能否需求掩盖。养成阅历。 c才干验证明验，掩盖和不掩盖的都做，不要吝惜那么一点点培育基或耗材，毕竟才干验证明验做的美丽才是实验室（是室而不是人！）才干的综合表现。 4、培育进程防止平皿枯燥。 培育进程中培育基可以倒的适当厚一些，比如25mL。培育箱底部接一个不锈钢盆，装上足量无菌水。 5、 实验培育进程勤观察。 微生物培育进程普通需求几小时到几十小时，要应用这段时间观察培育箱及菌生长状况，比如温度能否动摇，培育室内湿度如何等等，多思多看，预备预案。方有能够失掉与盲样分歧的实验结果。 原始记载应有条理、思绪明晰,完整准确地记载菌株鉴定检验的全进程,原始记载要包括时间、实验现象、实验结果三个要素，方便实验出现效果的查找。 结武判定 结果的判定普通依据设备操作，但是关于人为操作如评级、手工操作等结果能够会由于人员的差异而会有不同的偏向，这样在判定时*好是找有阅历的部门担任人或质量专家一块定夺，这样的话会增加很多不用要的错误。