SIVmac251直肠途径感染恒河猴模型

1.该模型制备比较成熟，国内外都有此模型，构建和评价指标一致，所以该模型应用广泛，具有统一的操作规程。

2. 该模型制备的关键：1）小鼠必须是重度免疫缺陷的，而且饲养环境必须洁净；2）HIV操作需要生物安全。

3.此模型具有完善的人的免疫系统，HIV感染后，具有艾滋病病人相似的临床症状，所以具有很高的比较医学应用价值。

1、1. SIVmac251直肠感染恒河猴血浆病毒载量结果

直肠途径接种SIVmac251病毒后，恒河猴血浆病毒载量均转为阳性，即在感染后病毒载量持续升高，14天病毒载量达到高峰，约107copies/mL左右，一直到35天均处于106-107 copies/mL的较高水平，随后载量下降并维持在104-105 copies/mL这一水平。

图1 SIVmac251直肠途径感染恒河猴血浆病毒载量结果

Fig.1 The viremia (viral RNAcopies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected intrarectallywith SIVmac251

1、 2. SIVmac251直肠感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值结果

感染猴CD4+/CD8+的比例在感染后出现持续下降，出现倒置现象。1006075和1007054分别于第14天、第21天将至最低点，数值分别为0.39和0.5。随后1007054的CD4+/CD8+的比例回升至1，此后一直在0.9上下波动；而1006075回升至1，后又降至0.5，此后一直维持在该水平。

图2 SIVmac251直肠途径感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值

Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaquesinfected intrarectally with SIVmac251

1、 3. SIVmac251直肠感染恒河猴CD4+和CD8+细胞绝对数结果

两只恒河猴CD4+细胞绝对数在SIVmac251感染后发生应激性增高，然后出现明显的大幅下降，随后又在短期内迅速反弹，并最终在40天前后达到相对稳定的状态。外周血中CD8+细胞变化不尽相同，经过急性期的剧烈震荡后，1007054猴在感染28天后水平基本稳定，1006075猴在感染28天后CD8+T细胞数量持续升高。

图3 SIVmac251直肠途径感染恒河猴外周血CD4+ 和CD8+细胞绝对数变化

Fig.3 TheCD4+ cell counts and CD8+ cellcounts (per l blood) in Chinese-original rhesus macaques infecte intrarectallywith SIVmac251

1、 实验用病毒：感染毒株为SIVmac251中国恒河猴细胞适应株，中国恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度为5×104 TCID50/mL。

2、 感染动物：选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。

3、 感染方法：将麻醉好的实验猴放在操作台上，动物采取俯卧位以保证直肠粘膜充分暴露，缓慢将10000TCID50的SIVmac251病毒液2mL注入肛窦处，实验猴保持此姿势30min。

4、 SIVmac251直肠感染猴样品采集和指标测定：在感染前和感染后3、7、10、14、21、28、35、42、56、70、84天采集EDTA抗凝血4mL，分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+和CD8+细胞绝对数。

5、 SIVmac251直肠感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。

6、 SIVmac251直肠感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+和CD8+细胞绝对数。

艾滋病(AcquiredImmunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

艾滋病动物模型简介

艾滋病发病机制研、药物和疫苗的保护性研究及评价等方面在很大程度上依赖理想的动物模型。人们发现HIV以后，用HIV感染过多种动物，但由于种种原因，结果并不理想。研究发现猴免疫缺陷病毒(SIV)感染实验用猴的模型效果比较理想，表现为和AIDS的临床表征，发病过程、免疫缺陷特征等非常相似，加之HIV和SIV有一定的基因同源性，人和猴的生物学特性也较其他动物接近，因而，SIV/SAIDS(猴艾滋病)模型被广泛接受和应用。

SIV是猴获得性免疫缺陷综合征（SimianImmune Deficiency Syndrome，SAIDS）的主要致病病毒，为典型的C型病毒粒子，基因组长度大约为9.2kb，基因组成同HIV-1和HIV-2基本相同，其完整的原病毒基因含有二个LTR以及同HIV类似的基因：gag、pol、vif、tat、rev、env和nef。所有基因在SIV的排列顺序同HIV完全一样。目前国内外对SIV的研究多集中在非克隆株SIVmac251和克隆株SIVmac239上，因为这两个病毒株能在多种猕猴属动物身上引发致死性免疫缺陷综合征，同时伴有CD4+淋巴细胞下降，继发机会性感染病毒性脑膜脑病。这些都与人类AIDS类似。

艾滋病的三种传播途径分别是经血液、性和母婴传播，性传播包括同性传播和异性传播两种方式。艾滋病动物模型的制备首先要考虑其实际应用价值，最好的动物模型可以最大限度的模拟人类疾病，包括使用与自然感染相同或接近的方式建立模型。为模拟同性间性传播的感染方式，通过直肠粘膜上皮途径感染，病毒直接感染M细胞、上皮细胞等。直肠的生理构造及上皮细胞厚度非常薄等特点，都使直肠感染较阴道感染容易发生。将病毒缓慢注入猴直肠内，可建立同性性传播动物模型。