心肌缺血再灌注大鼠模型

动物症状观察：

表现为体重减轻、弓背竖毛，在回输后的一个月后死亡。

1.术中心电图：如结扎成功，心电图将会出现ST段抬高。

2.再灌注28天彩超

假手术组心室大小正常，前壁运动良好，手术组心室明显扩大，前壁几乎无运动。

3.再灌注24小时心肌梗死面积

4.再灌注28天masson染色

1.SD大鼠 ，名称：SS/JrHsdMcwiCrlVr，近交系（Inbred Rat）

品系来源 ：动物来源：由美国的Sprague & Dawley农场的R.W.Dawley用杂合的雄性大鼠和Wistar雌性大鼠杂交后育成的一个白化封闭群大鼠，1950年传入美国的癌症研究所（CRL），1955年进行生物净化，1964年传入美国各地，同时传入法国。1992年自美国NIH引入到中科院上海实验动物中心。 动物外部特征：白化 遗传基本组成：远交群大鼠 种群数：核心群35对，增殖群100对 特点：生长快，繁育性能好，大多用于安全性试验及营养与生长发育有关的研究。该品系对性激素敏感，对呼吸道疾病有较强的抵抗力。

2.心肌缺血/再灌注损伤大对照鼠SS-13BN Rat，名称：SS-Chr13BN/McwiCrlVr，

同类系（Consomic Rat）

3.诱导方法

1）大鼠称重后，使用2%戊巴比妥（用生理盐水配置），按0.3ml/100g体重经腹腔麻醉。根据大鼠四肢肌张力确定麻醉良好后，仰位固定大鼠于手术台上，颈前区及心前区剃毛。

2）颈前区消毒，剪开颈部正中皮肤，分离组织，沿气管方向进行气管插管，气管导管接呼吸机，参数设置：潮气量 2ml/100g体重，频率55-60次/min，吸呼比 1：1。

3）心前区消毒，于胸骨左缘第四肋水平剪开长约2cm的水平切口，钝性分离皮肤与肌肉，于胸骨左缘第 4 肋间隙开胸，剥开心包，暴露心脏，在肺动脉圆锥与左心耳之间，隐约可见心肌层下面细小、透亮、粉红左主冠状动脉前降支。

4）无创小圆针5-0丝线在左心耳下缘前降支左侧进针，进针深度控制在 1mm，宽度为3mm 左右，器械打一活结，造成暂时心肌缺血，45min 后松开丝线恢复冠脉血流。假手术组左主冠状动脉仅穿线不结扎。

5）通过肉眼观察结扎前后左室前壁的局部颜色变化，判断模型是否成功。结扎成功时，可见受累左室局部瞬间苍白，随即发绀、肿胀以及收缩力下降，成功再灌注时数秒内左室局部迅速充血，缺血心肌颜色由暗红变为鲜红。

6）依次缝合关闭肋间隙，肌肉，以及皮肤，酒精消毒皮肤。观察大鼠直至苏醒。

近年来随着动脉搭桥术、溶栓疗法、经皮腔内冠脉血管形成术、心脏外科体外循环等方法的推广应用，使心肌梗死后重新得到血液再灌注。多数情况下，缺血后再灌注可以使心肌功能恢复，但有时不仅不能改善心肌功能，反而加重心肌细胞的损伤，即心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI）。然而心肌梗死最主要的治法仍是血管再通、恢复心肌细胞的血流供应，如何预防缺血再灌注的损伤仍是目前待解决的问题。

MIRI的发病机制尚未彻底阐明，目前认为自由基的作用、细胞内钙超载及白细胞的激活是缺血再灌注损伤的重要发病环节。[1]当组织细胞缺血缺氧时OFR清除系统功能降低或丧失，而生成氧自由基的系统活性却增强，一旦恢复组织血液供应和供氧，OFR便会出现大量且急剧的堆积，其会以不同方式造成细胞急性或慢性损伤。[2]细胞内钙超载引起的损伤机制与以下几点有关①大量钙离子涌入细胞，触发线粒体、肌浆网摄取钙离子，从而消耗大量ATP，同时钙离子形成不溶性的磷酸钙，抑制线粒体ATP合成，加重细胞能量代谢障碍，[3] ②胞内钙离子增多，则钙依赖性蛋白酶活性增强，后者使黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶，从而增加氧自由基生成。③胞内钙离子升高，可激活某些ATP酶，从而水解细胞高能磷酸盐，产生大量的氢离子加重细胞内酸中毒。④钙离子增多还能激活磷脂酶类，使膜磷脂降解，导致细胞膜及细胞器膜受损。 [4] 白细胞尤其是中性粒细胞在缺血组织聚集浸润，对心肌缺血及再灌注损伤的发生及严重程度起到了重要作用[5,6]激活的中性粒细胞及血管内皮细胞释放大量的致炎物质，如自由基、蛋白酶、溶酶体等，不但改变了自身结构和功能，而且造成周围组织细胞损伤。