光化学法诱导食蟹猴脑缺血模型

动物症状观察：

表现为体重减轻、弓背竖毛，在回输后的一个月后死亡。

实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准(ILAS-GC-2012-001)。

1.模型评价

1.1 行为学：

1）精准上肢运动测试

前期训练：实验者首先使动物消除恐惧心理，诱导动物能从实验者手中抓取水果块。与动物建立感情后，挂上实验装置，将水果块置于食槽中央。逐步引导动物从投食处取食。

每天上、下午固定时间各进行一次。训练期间每日喂食改为一次，每次30g，训练结束后给与。保证饮水。训练期间监控动物体重，根据体重调整喂食量。

数据采集：所有动物从实验装置中的采食状况稳定后进行本底数据采集。方法：将苹果切成2×2×2cm大小的正方形块，摆放在食槽中央，每次5块。用秒表记录动物将5块水果全部取走的时间。每次数据的采集在一天内完成，共5次，每次间隔2h。每次采集时，水果块的大小、形状及摆放位置要一致。造模后1d，3d，1w，2w，3w，4w采集实验数据，方法和采集时间与本底数据的采集相同。比较造模前后动物左上肢抓取水果块的时间，评价造模效果。

2）神经功能评分：造模后1d，3d，1w，2w，3w，4w使用经过修改、细化的Kito灵长类动物神经功能损害评分表对模型动物进行神经功能评分，其中意识28分，感觉系统22分，运动系统32分，骨骼肌共济协调18分共100分。

结果：动物在麻醉苏醒后均出现了与梗死部位相对应的神经系统定位体征。主要表现为动物苏醒后6h内表现为有意识但情绪低落，对疼痛和声音刺激不反抗。骨骼肌出现共济失调。左前肢出现明显的麻痹，不能抓握。术后3d部分动物的抓握能力有所恢复，但在采集数据的各个时间点，动物左上肢抓取水果块的时间上均存在极显著性差异。

1.2 影像学检查：

1）头颅MRI扫描：造模后24h，以后每2w一次进行MRI检查，观察血肿及周围的水肿、血肿情况；仪器型号：Philips Intera Achiva 3.0T磁共振仪，8道头部线圈。方法：将动物麻醉后固定于免磁的头架上，放入头部线圈内。T1扫描序列为IR，视野：120mm,TR/TE:2153ms/13/ms,层厚/间隔：3mm/0.3mm，矩阵256X256。

2）18F－FDG-PET头颅扫描：仪器：SiemensECAT EXACT HR+ 型高分辨PET仪（32环BGO晶体，空间分辨率5mm）。造模后24小时，以后每2周一次进行PET扫描。方法：动物麻醉后从股静脉注入 37-47MBq（1.0-1.3mCi）的 18F—FDG，30min后行PET检查，采用3D采集模式，扫描时间10min。观察梗死周围能量代谢情况。

结果：MRI检查结果可见在手术相应区域出现明显缺损，缺损面积随时间的推移减小。PET结果显示右侧大脑皮层梗死区代谢明显减低。（图3）

1.3 组织病理学检查：造模后12h、6w、12w后分别处死动物1只、3只、3只动物，取脑组织进行固定、切片，通过H.E染色、免疫组织化学染色方法观察梗死灶周围的病理学改变。使用AperioGL 系统对切片进行扫描和分析。

结果：大体观察：术后12h双侧大脑水肿，手术侧较未手术侧严重。右侧大脑手术区域可见明显梗死灶。6w、12w未见明显水肿，仍可见明显梗死灶。镜下：术后12 h：脑膜血管扩张充血。软脑膜下出血。局部脑组织（皮质）水肿，神经细胞数量减少，可见神经细胞变性坏死，毛细血管扩张充血。缺血灶最宽处面积达面积11.570mm × 3.687 mm。可见红染无结构物质嵌入大脑皮层。术后6w：脑膜血管扩张充血，局部内皮细胞脱落。软脑膜水肿。软脑膜下大脑皮质小灶性坏死，泡沫细胞浸润。坏死区面积3.186mm × 6.057 mm。坏死灶周围脑组织水肿，神经细胞变性坏死。术后12w：脑膜血管扩张充血，软脑膜下少量出血。局部大脑皮质轻度水肿。坏死区面积2.576mm × 5.377mm。

A 造模后12 h，脑组织水肿，可见明显梗死灶

B造模后12 h，梗死灶面积达3.687mm×11.57mm。

C造模后12 h，脑组织内毛细血管扩张充血，大脑皮质局部水肿（HE×200）

D造模后12 h，神经细胞变性坏死（HE ×400）

E造模后6w，未见明显水肿，可见明显梗死灶

F造模后6w，梗死灶面积3.186 mm × 6.057 mm

G造模后6w，脑组织坏死，泡沫细胞浸润（HE× 100）

H造模后6w，脑组织坏死区毛细血管内黄色结晶，泡沫细胞浸润（HE×200）

I造模后12w，未见明显水肿，可见明显梗死灶

J造模后12w，梗死灶面积2.576 mm × 5.377mm

K造模后12w，脑组织坏死，泡沫细胞浸润, 坏死区毛细血管内黄色结晶（HE× 100）

L造模后12w，神经细胞变性坏死（HE ×400）

1、模型制作

1.1术前准备：手术前12h禁食，6h禁水。氯胺酮15mg/kg对动物进行麻醉，当动物出现呼吸浅慢、角膜反射迟钝，为麻醉适度表现。

1.2制作局部脑缺血模型：麻醉后的动物采用俯卧位固定在立体定位仪上，颅顶区备皮，常规消毒手术区皮肤，沿矢状面在颅顶正中切开长约4 ～ 5 cm的切口，逐层分离皮下组织、帽装肌腱、肌肉、骨膜，用扩张器充分暴露手术视野。使用便携式颅钻在顶骨裂处进行颅骨钻孔，以钻透颅骨，达硬脑膜为止（有落空感）。钻好的孔为椭圆形，大小为3.0 cm × 1.5 cm，其长轴与颅骨正中线垂直。将冷光源发生器的发光口固定于颅顶开口处。周围用浸透生理盐水的无菌纱布覆盖伤口。用铝箔纸遮盖动物眼睛，避免光化学反应对动物视网膜的损害。静脉注射玫瑰红B35 mg/kg，从注射完毕开始计时，10 min后打开光源，电子光强选择6，机械光强选择C，照射10 min。第一次注射后5 min第二次注射玫瑰红B，浓度与第一次相同。第一点照射完毕后，向颞侧移动光源发光口，在第二点照射10 min。照射完毕，移去光源。缝合骨膜、皮肤。 肌肉注射青霉素40万U预防感染。

一、疾病名称

缺血性脑卒中（Cerebralischemic stroke）

二、缺血性脑卒中简介

缺血性脑卒中是指由于脑的供血动脉（颈动脉和椎动脉）狭窄或闭塞、脑供血不足导致的脑组织坏死的总称。

病因：血管缺血性损伤是由于各种原因诱发脑血管栓塞引起脑组织缺血、缺氧，进一步诱发脑神经细胞变性、坏死，最终导致神经功能障碍、丧失。从缺血的影响范围可将脑缺血分为局限性脑缺血和弥漫性脑缺血。局限性脑缺血的病因有：大脑中动脉栓塞；颅外颈内动脉或椎动脉狭窄、闭塞或血栓形成；脑动脉痉挛。弥漫性脑缺血的病因有：心搏骤停、低血压、贫血、低血糖等。

临床症状：突发的对侧肢体麻木、力弱、感觉障碍、单眼黑矇、眩晕、复视、双眼黑矇、共济障碍等。

治疗：根据分期分型对症治疗。发作频繁者，近期内发生脑梗塞的可能性很大，应积极治疗，防止发生脑梗塞。积极治疗危险因素如高血压、高血脂、心脏病、糖尿病、脑动脉硬化；预防性服用抗血小板积聚药物；改善脑循环。