大鼠心肌缺血/再灌注模型

心脏结扎后左心室颜色变得苍白，再灌注后松几秒内可恢复红色。心肌酶检测肌钙蛋白、肌红蛋白、CKMB升高。24小时后心肌梗死病灶明显。28天后心室重构，心功能减弱，心室纤维化病变。

实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准(ILAS-GC-2012-001)。

再灌注24小时后，假手术组没有心肌梗死，而手术组出现白色的梗死灶。再灌注28天后假手术组没有出现纤维化，手术组出现大量纤维化。手术造模后6-8周，心脏超声检测心功能显著降低，证明心肌病的发生。

1）大鼠称重后，使用2%戊巴比妥（用生理盐水配置），根据体重戊巴比妥钠麻醉，剂量50mg/Kg，。根据大鼠四肢肌张力确定麻醉良好后，仰位固定大鼠于手术台上，颈前区及心前区剃毛。2）颈前区消毒，剪开颈部正中皮肤，分离组织，沿气管方向进行气管插管，气管导管接呼吸机，参数设置：潮气量 2ml/100g体重，频率55-60次/min，吸呼比 1：1.3）心前区消毒，于胸骨左缘第四肋水平剪开长约2cm的水平切口，钝性分离皮肤与肌肉，于胸骨左缘第 4 肋间隙开胸，剥开心包，暴露心脏，在肺动脉圆锥与左心耳之间，隐约可见心肌层下面细小、透亮、粉红左主冠状动脉前降支。4）无创小圆针5-0丝线在左心耳下缘前降支左侧进针，进针深度控制在 1mm，宽度为3mm 左右，器械打一活结，造成暂时心肌缺血，45min 后松开丝线恢复冠脉血流。假手术组左主冠状动脉仅穿线不结扎。5）通过肉眼观察结扎前后左室前壁的局部颜色变化，判断模型是否成功。结扎成功时，可见受累左室局部瞬间苍白，随即发绀、肿胀以及收缩力下降，成功再灌注时数秒内左室局部迅速充血，缺血心肌颜色由暗红变为鲜红。6）依次缝合关闭肋间隙，肌肉，以及皮肤，酒精消毒皮肤。观察大鼠直至苏醒。

高血压是由多基因、多环境因素及个人不良习惯相互作用而导致的一种慢性复杂疾病，也是危害人类健康的主要疾病之一。盐是高血压的重要环境因素，个体对盐负荷或限盐呈现不同的血压反应，因此存在盐敏感性问题[1]。盐敏感性是高血压、心脑血管病和其它疾病（如哮喘、胃癌和肾功能不全等）发病及致死的一个潜在危险因素 [2]。因此在高血压临床诊治过程中，考虑盐敏感性将有利于对高血压分类、危险分级以及对症治疗。

盐敏感性通常涉及人口、种族、社会因素以及肾功能、激素水平和饮食习惯等[3]。不同种族和人群盐敏感性个体的检出率不同，而且血压的盐敏感性随年龄增长而变化，特别是高血压患者。盐敏感性由Weinberger ADDIN EN.CITE[4]给出定义：静脉滴注2L生理盐水，测量平均动脉压（MAP），次日早晨给予低钠饮食后再测量MAP，两次MAP相差≥10mmHg为盐敏感性，否则为盐耐受性。Yatabe ADDIN EN.CITE ADDIN EN.CITE.DATA [5]定义盐敏感指数（SSI）为低盐和高盐饮食后MAP的差值与低盐饮食MAP的商，若SSI≥5%为盐敏感性。

高盐摄入引起血压升高主要有两方面原因：一方面是肾小管对Na+ 重吸收增加，导致水钠潴留，血浆容量增加，从而血压升高；另一方面是内源性哇巴因物质分泌增多，特异性抑制钠泵，胞内钠离子浓度增加，Na+/Ca2+交换体被激活，细胞内Ca2+ 浓度升高，最终导致血管平滑肌或心肌收缩，引起高血压[6]，可见钠水调节紊乱是盐敏感性高血压发病的主要诱因。有研究表明，胃肠道在维持机体钠水平衡方面具有重要的作用。人体胃肠道每天大约吸收7～9升液体，这一吸收过程主要是由钠依赖的营养物质同向转运体和钠离子转运体共同介导。在基础状态和进食后，小肠内钠吸收主要是通过钠氢交换体（NHE）。在小肠细胞的顶膜上，将肠腔内的钠转运至小肠细胞的电中性钠氢交换体主要有NHE2、NHE3和NHE8，在结肠中主要的电中性钠吸收通道为ENaC。在这些钠吸收通道中NHE3是非常重要的一个钠离子吸收通道。但小肠NHE3的特异性作用还不清楚。DR. Rieg构建了小肠特异NHE3敲除小鼠VillinCre, 并发现该小鼠成年率为0，均为出生后几天死亡，证实肠道中NHE3调节钠水平衡至关重要。

基于肠道NHE3对于机体钠水平衡的调节作用，相关领域已经开展了NHE3抑制剂药物用于高血压治疗的研究，但是NHE3抑制剂都存在明显的副作用，大鼠及人体实验证实NHE3抑制剂药物能够引发中度或重度腹泻。已有测序研究发现NHE3编码基因SLC9A3与先天性钠腹泻（CSD）密切相关，SLC9A3 基因N端钠离子转运结构域发生突变，能够引发NHE3功能缺失，从而诱导CSD发生。提示直接抑制NHE3的药物虽然能够显著降低血压及钠离子重吸收，但无法解决对机体的副作用。因此，我们研究通过其它通路间接抑制NHE3功能来降低血压。最新研究发现，胃泌素不仅能够调节胃酸分泌，还对机体内肾脏钠氢交换体3（NHE3）等离子泵具有重要的调节作用。同时，我们实验室先前的研究结果也表明，胃泌素能够通过抑制NHE3活性参与机体钠水代谢和血压调节，从而改善盐敏感性高血压大鼠的血压状况。由于小肠中存在大量的胃泌素受体，因此我们采用基因工程的方法，敲除小肠道CCKBR基因以抑制胃泌素对NHE3活性的调节作用，从而造成胃肠道钠水平衡的失调，诱导小鼠盐敏感性高血压模型。