HIV-1 BLT 小鼠静脉感染模型

健明迪检测提供的HIV-1 BLT 小鼠静脉感染模型,讨论与结论 1.该模型制备比较成熟,国内外都有此模型,构建和评价指标一致,所以该模型应用广泛,具有统一的操作规程,具有CMA,CNAS认证资质。
HIV-1 BLT 小鼠静脉感染模型
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讨论与结论

1.该模型制备比较成熟,国内外都有此模型,构建和评价指标一致,所以该模型应用广泛,具有统一的操作规程。

2. 该模型制备的关键:1)小鼠必须是重度免疫缺陷的,而且饲养环境必须洁净;2)HIV操作需要生物安全。

3.此模型具有完善的人的免疫系统,HIV感染后,具有艾滋病病人相似的临床症状,所以具有很高的比较医学应用价值。

生物安全性

所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。

评价验证

1、1. SIVmac251静脉感染恒河猴外周血病毒载量结果

8只SIVmac251静脉感染恒河猴均在感染后7d检出病毒载量阳性,之后迅速上升,在感染后14d达到高峰,峰值在107至108copies/mL之间,随后迅速下降(图1)。SIVmac251静脉感染后42d到140d感染猴的血浆载量比较稳定,1、2、3、4、9、11六只感染猴血浆病毒载量维持在105至107copies/mL之间;10号猴血浆病毒载量下降至105copies/mL以下;12号猴血浆病毒载量一直维持在较高水平,即107copies/mL以上。

图1 SIVmac251静脉感染中国恒河猴外周血病毒载量结果

Fig.1 Theviremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SIVmac251

1、 2. SIVmac251静脉感染恒河猴CD4+/CD8+比值结果

8只感染猴CD4+/CD8+的比例在SIVmac251静脉感染后持续下降,均于感染后14d出现倒置。2、4、10、11、12猴在感染后期一直维持在1以下的水平,其中,2、10、11三只猴维持在0.5上下波动。1、3、9三只感染猴在SIVmac251静脉感染后期CD4+/CD8+比值有些许反弹,在1.0上下波动。(图2)。

图2 SIVmac251静脉感染中国恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞比值

Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SIVmac251

3.SIVmac251静脉感染恒河猴CD4+ T细胞绝对数

8只感染猴CD4+细胞绝对数在SIVmac251静脉感染后迅速下降,随后发生回弹,在感染后56d下降至最低,之后维持在稳定水平(图3)。12号猴的CD4+细胞绝对数在感染后231天下降至50个/µL,出现艾滋病症状,继而死亡。4号猴的CD4+细胞绝对数在感染后259天下降至100个/µL以下;3号猴的CD4+细胞绝对数一直在800-1000个/µL上下浮动。

图3 SIVmac251静脉感染中国恒河猴外周血CD4+T淋巴细胞绝对数

Fig.3 The CD4+T cell counts (per l blood) in Chinese-origin rhesus macaques infectedintravenously with SIVmac251

制备方法

1、 实验用病毒:感染毒株为SIVmac251中国恒河猴细胞适应株,中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为5×103 TCID50/mL。

2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。

3、 感染方法:将1 mL含有50 TCID50 的SIVmac251病毒经后肢静脉接种恒河猴。

4、 SIVmac251静脉感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后7、14、21、28、42、56、84、112、140、168、196、231、259、287天采集EDTA抗凝血4mL,分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数。

5、 SIVmac251静脉感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。

6、 SIVmac251静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。

研究背景

文献来源:Pulmonary Tuberculosis in Humanized Mice Infected with HIV-1

PMID:26908312

DOI:10.1038/srep21522

模型信息

中文名称:HIV-1 BLT 小鼠静脉感染模型

英文名称:HIV-1 BLT mice intravenously infected model

类型:艾滋病毒动物模型

分级:NA

用途:用于艾滋病相关研究

研制单位:德克萨斯大学医学分校

保存单位:德克萨斯大学医学分校

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