BAPN诱导小鼠胸主动脉瘤模型

主动脉瘤的发病率在老年人群中可以高达5-10%，胸主动脉瘤的患病率占主动脉瘤的20.3%～37%。但是关于胸主动脉瘤的动物模型较少。在多种方法诱导的腹主动脉瘤模型中，胸主动脉瘤的发病率较低。

与CaCl2诱导的模型、脱细胞主动脉移植模型、囊状动脉瘤动物模型，AngII诱导等动物模型相比，BAPN诱导的动物模型的优点如下：1）操作简单，不需要手术，使用的是3月龄C57BL/6J小鼠，而不是基因工程小鼠；2）相较于传统的BAPN饮水，灌胃给药方式更稳定，给药剂量更可控；3)成瘤率高，大约85%，成瘤部位主要集中在胸主。该法造模的特点：大体及超声检测能够发现主动脉直径增厚超过50%；夹层瘤部冰冻切片HE 染色可见主动脉扩张现象严重，纤维化加剧，弹力纤维断裂，将可进一步应用于胸主动脉瘤疾病的手术和药物研发 。

动物模型制备过程中，由饲养人员进行日常饲喂，由兽医进行监督管理，造模期间动物状态良好，每天记录病死只数，造模选用按动物体重确定灌胃剂量，对动物伤害小，每周称重一次，未使用微生物，对环境没有影响，造模方法简便易，行重复性好，不可遗传。

1.大体结构观察胸主动脉夹层瘤，超声观察夹层瘤直径。

大体结构显示，BAPN给药组胸主动脉处有明显的瘤状突起。超声结果显示BAPN诱导胸主动脉瘤组，给药四周后，胸主动脉直径超过对照组直径的50%，认为造模成功。

2.夹层瘤冰冻切片HE染色

HE染色结果显示，和对照组相比，BAPN诱导组小鼠胸主动脉节段出现弹力纤维降解，细胞外基质沉积和炎症细胞增多的现象。

胸主动脉瘤(aortic aneurysm) 常发生在升主动脉主动脉弓、胸部降主动脉， 主动脉壁局部或弥漫性的异常扩张超过正常值 50%以上，压迫周围器官而引起症状。

小鼠胸主动脉瘤模型：瘤体发生部位为胸主动脉，主动脉直径扩张程度，病理特征为炎细胞浸润，弹力纤维降解。

1 实验材料

实验动物 选择健康雄性C57小鼠，3周龄，体质量10-15g，均购于北京华阜康华生物科技股份有限公司。饲养于中国医学科学院实验动物研究所动物中心动物房内，5只/盒屏障系统中，温度( 22±2) ℃，湿度50%～60%，12 h 循环照明，小鼠自由摄取食、水，IACUC号：ILAS-YZW17007。

2 方法

2.1 动物模型制备

BAPN用水溶解成50mg/ml的储存液。C57BL/6J小鼠根据体重，按1g/kg/d的剂量进行BAPN灌胃，4周，每周测量体重一次，根据体重变化，调整给药量。

2.2 标本采集及处理

完成灌胃四周后，称体重，麻醉后腹主动脉采血至死亡，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，-80℃冰箱冻存。取心脏、主动脉做石蜡切片，10%中性福尔马林中固定，30%蔗糖脱水，冰冻切片包埋剂包埋并切片；进行免疫组化及免疫荧光检测，其余血管组织液氮冷冻-80℃保存，提取蛋白进行免疫印迹检测。

一、疾病概述

主动脉瘤(aortic aneurysm) 指主动脉壁局部或弥漫性的异常扩张超过正常值 50%以上，压迫周围器官而引起症状，常发生在升主动脉主动脉弓、胸部降主动脉、胸腹主动脉和腹主动脉，其发病率在老年人群中可以高达5-10%，并呈上升趋势。主动脉瘤可由多种因素引起，如家族遗传、高血压、动脉硬化等，其主要病理改变为血管壁弹力纤维断裂及平滑肌细胞病变和血管外膜胶原沉积。主动脉瘤根据发病位置可分为胸主动脉瘤和腹主动脉瘤。胸主动脉瘤发生在所有年龄段的人，没有性别关联，并且与遗传因素高度相关。相反，腹主动脉瘤的发生与年龄，性别，动脉粥样硬化和吸烟有关，但与遗传关联较弱。

约80%的胸主动脉瘤是继发于高血压病动脉粥样硬化，14%是由于梅毒引起，其他的原因包括先天新因素、马方综合征及胸部顿挫伤。大多发生于60岁以后，男女之比为10：2。胸主动脉瘤的患病率占主动脉瘤的20.3%～37%。

本病发病缓慢，早期多无症状和体征，至后期由于动脉瘤压迫周围组织而产生症状，其临床表现由于动脉瘤的大小、形状、部位和生长方向而有不同。胸主动脉瘤的手术疗法在时间的选择上仍然受多种因素影响。目前也是以手术干预为主，没有有效的药理治疗方法，构建小鼠胸主动脉瘤动物模型为胸主动脉瘤发病机制的研究和药物评价研究提供支撑。

二、研究背景

1、造模因素信息

BAPN诱导小鼠胸主动脉瘤模型

2、实验动物背景信息

3周龄C57BL/6J小鼠

3、研究背景

该动物模型的研究目的及意义；该动物模型的国内外研究进展并附参考文献。

主动脉瘤动物模型是研究人主动脉瘤的重要工具，对阐释主动脉瘤的病理生理学机制、研发和评价主动脉瘤的治疗药物都具有重要意义。当前关于腹主动脉瘤的动物模型有很多，也比较成熟，但是关于胸主动脉瘤的动物模型较少。在多种方法诱导的腹主动脉瘤模型中，虽有胸主动脉瘤的发生，但胸主动脉瘤的发病率较低。当前应用最广泛的主动脉瘤动物模型包括弹性蛋白酶诱导的模型、CaCl2诱导的模型、脱细胞主动脉移植模型、囊状动脉瘤动物模型，AngII诱导的动物模型、醛固酮受体激动剂加高盐诱导的动物模型、基因编辑的动脉瘤动物模型 [1-6]。而β-氨基丙腈（BAPN）诱导的动物模型则是最近几年发现的一种新的诱导胸主动脉瘤的方法[7]。 BAPN是赖氨酰氧化酶（Lox）的强大抑制剂，Lox是由血管平滑肌细胞释放的一种酶，参与前胶原和原弹性蛋白的共价连接，产生不溶物原纤维[8]。Lox通过调控不溶性ECM在血管发育中起关键作用。小鼠中Lox基因组失活可导致动脉瘤的形成[9-10]。该模型的优点如下：1）操作简单，不需要手术，使用的是3月龄C57BL/6J小鼠，而不是基因工程小鼠；2）相较于传统的BAPN饮水，灌胃给药方式更稳定，给药剂量更可控；3)成瘤率高，大约85%，成瘤部位主要集中在胸主。

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