再生障碍性贫血小鼠模型

该模型是模拟免疫机制导致再障，还有很多不同品系小鼠免疫细胞诱发的尝试。另外一种类型的再障与遗传缺陷有关包括范科尼贫血（FA）、先天性角化不良（DKC）和Shwachman-Diamond综合征（SDS），这分别是由于范科尼贫血、端粒酶相关（DKC、TERT、TERT）和SBDS基因中的遗传性病变所致。阵发性夜间血红蛋白尿症（PNH）是PIG-a基因发生体细胞突变，导致造血细胞缺乏糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定蛋白（如CD55、CD59），临床表现为血管内溶血、全血细胞减少和血栓形成倾向。这些基因改变包括突变或染色体截断、增加或易位，导致包括BM在内的多个器官的功能改变。通过构建基因工程动物模型的开发有助于这类疾病的研究。

进行电离辐射照射设备是自屏蔽，对操作人及环境安全。

1.外周血常规指标测定外周血各项指标中AA模型组小鼠与对照组相比见表1，WBC降低70．2％(P<0．05)，PLT降低39．4％(P<0．05)，RBC降低19．9％(P<0．O5)，HGB降低17．0％(P<0．05)，Ret降低30．4％(P<0．05)；IR组与对照组相比，WBC降低52．1％(P<0．05)，其余指标无统计学差异。

2． 骨髓有核细胞免疫学分型每只小鼠均取左侧股骨冲洗骨髓后计数BMMNC，从模型组较对照组低51．84％(P<0．05)。流式细胞仪检测细胞表面抗原进行分型，见表2。AA模型组Gr-1 、Ter-119 、CDllb 细胞比率均低于对照组(28．52％，P<0．05；75．63％ ，P<0．05；10．22％ ，P>0．05)；AA模型组CD5 、B220 细胞比率高于对照组(51．28％，P<0．05；78．21％ ，P<0．05)。IR组与对照组相比，只有BMMNC计数和B220 细胞2项指标有显著性差异。

1.实验动物近交系DBA／2小鼠2只，22—24 g，雄性，由中国医学科学院医学实验动物研究所提供(合格证号：SCxK(京)2005．0013)。近交系BALB／C小鼠3O只，20—22 g，雄性，由中国辐射防护研究院提供(动物许可证编号：scxK(京)2007．0001)。全价清洁饲料由北京科奥协力饲料有限公司提供。

2．试剂流式检测用抗体均是eBioscience产品。

3．照射条件γ射线，剂量为5.0Gy，剂量率为1.1Gy／min。

4. 动物模型建立方法

4.1 动物分组取生长良好的BALB／C小鼠30只，随机分为3组，每组10只，即对照组、照射组、AA模型组。对照组进行假照射，照射组和AA模型组进行照射。

4.2 AA动物模型制备将DBA／2小鼠(供鼠)颈椎脱臼法处死，常规消毒后，在超净工作台中无菌取出胸腺，置于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中，除去粘附的结缔组织、剪碎、轻磨、200目不锈钢网过滤，制成单细胞悬液，台盼蓝鉴定细胞活性(在95％以上)，计数后用RPMI1640培养液调细胞浓度为5×106／ml备用。BALB／c小鼠经5.0Gy剂量γ射线全身照射，4 h后经尾静脉输人DBA／2小鼠的胸腺细胞悬液0.2 ml／只，含细胞数为1×106个，建立AA小鼠模型10只。对照组和照射对照组尾静脉注入等量的RPMI1640培养液。实验第15日检测各项指标评估动物模型是否成功构建。

5. 实验评价

5.1 外周血常规指标 测定模型制备至第15日，小鼠眼球取血200／A，EDTA．K3抗凝，用自动血细胞计数仪(poeH．100i，希森美康，日本)测定外周血白细胞数(WBC)、红细胞数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、血小板(PLT)等指标；取抗凝血100uL，1％煌焦油蓝染色后镜下计数网织红细胞(Ret)。

5.2骨髓有核细胞计数处死小鼠，取小鼠左侧股骨，用2 ml冲洗液冲出骨髓，在血细胞计数仪上测定骨髓有核细胞数(BMMNC)。

1、造模因素信息

模型小鼠接受高剂量电离辐射。照射条件为γ射线，剂量为5.0Gy，剂量率为1.1Gy／min。

2、实验动物背景信息

近交系DBA／2小鼠；BALB／C小鼠。

3、研究背景

再生障碍性贫血，系多种病因引起的造血障碍，导致红骨髓总容量减少，造血衰竭，全血细胞减少为主要表现的一组综合征。其发病机制除与造血干细胞本身缺陷、造血微环境损伤有关外，免疫功能是再障重要的发病原因。

AA动物模型构建方法有物理方法、化学方法、免疫介导方法和混合方法。评估指标主要包括，全血细胞、网织红细胞减少，骨髓象三系血细胞减少。

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3.张恒; 王月英; 吴红英; 李德冠; 王小春; 路璐; 常建辉; 翟志斌; 孟爱民. 再生障碍性贫血小鼠模型的免疫学评价，中国实验诊断, 2011,15(9):1421-1424

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