肌苷致急性高尿酸血症恒河猴模型

该模型通过长期观察普通狼疮小鼠模型，待其到40周龄时，检测其dsDNA等，结合皮肤症状变化，来确定慢性狼疮皮肤病模型的建立。目前国际上尚欠缺类似模型，为研究狼疮皮肤病发病机制提供了工具。

模型动物饲养在武汉大学人民医院动物房SPF级动物实验室，实验动物使用许可证SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特点

门采用专用净化密闭门并配备观察窗。单向走道呈顺时针走向设计。屏障系统内共有大鼠饲养室1间，小鼠饲养室3间，隔离观察室1间，实验准备室1间，洁物存放室1间，清洗消毒室1间。此外，屏障系统外配有监控室、机房和配电室等。

（2）设计参数

室内温度：20～26°C；日温差：≤4°C；相对湿度：40%～70%；换气次数：15～20次/h；气流速度：≤0．2m/s；压强梯度：20～50Pa；空气洁净度：7级；菌落数：≤3个/皿；氨浓度：≤14mg/m3；噪声：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；动物照度：15～20lx；昼夜明暗交替时间：12/12h。

（3）通风和空调系统

动物实验室采用全新风中央空调通风系统。空气经过初、中、三级过滤器后进入实验室内环境。

（4）照明系统

一更、淋浴、二更、气闸、清洁走道、洁物存放处、污物走道、缓冲间和清洗消毒间、动物饲养室、实验准备间、隔离观察室和功能实验室等安装有手动和自动开关，根据实际需要，调节控制室内照明灯。未启用房间、清洁走道、洁物存放处、污物走道等在每日中午12点和晚上8点开启紫外线灯照射1h。

（5）通讯系统

因为SPF级动物实验室的环境和设施具有特殊要求，人员进入后不能随意出入，而室内外的联系又十分重要，故室内各房间均安装内部电话机，按照房间顺序编排电话号码，各室内电话可相互连通，并均与监控室总机保持联系，保证实验室内外信息的及时沟通。

（6）监控系统

对SPF级动物实验室的出入口、走道、实验动物饲养室、功能操作室等重要位置均安装了可作270°旋转的摄像机，能够及时了解设施的运行状态；也能有效督促实验人员执行科学的操作规程，避免人为因素造成室内环境和设施的污染；并对整个实验期间的动物状态和反应进行观察，减少对动物的滋扰。

（7）供水系统

SPF级实验动物饮用水以纯净水为宜。本实验室采用管道供水，将处理后的纯净水用塑胶管道输送到屏障系统内实验准备室，设置接水槽，为实验动物供应灭菌的饮用水和屏障系统内用水。要经常更换和清洗输水管道，清洗笼具的用水添加适当比例的84消毒液。

（8）供电系统、警报系统和消防设施

SPF级动物实验室要求全天候不间断供风和供电，如果出现故障，不能及时发现和处理，就可能导致环境设施的污染、动物感染或死亡，造成严重后果。因此应对SPF级动物实验室使用独立稳定的供电系统，并配备有应急电源。在中央空调机房控制室安装风机故障警报系统，以便及时检修和维护，保证设施的安全运行。

（9）消毒灭菌设备

为防止外界物品进入SPF级动物实验室时所携带的细菌污染室内环境和造成动物交叉感染，按照不同物品的特性，进行紫外线照射消毒、渡槽消毒液消毒或专用的机动门真空灭菌器消毒。

（10）动物饲养笼具

饲养大、小鼠的笼具聚碳酸脂材料的塑胶笼具，具有高透明、耐高压、耐高温、耐酸碱等特点。通用的不锈钢笼具长、宽、高分别为40、30、20cm，适用于单笼饲养有特殊要求的实验动物，配有底盘和食槽，确保实验动物有充足的采食和活动空间，同时也保证室内环境的清洁。

（11）垫料的选择和使用

在使用塑胶垫料时，垫料是大小鼠直接接触的铺垫物，起到吸湿、保暖和造窝的作用。垫料的好坏直接影响到大小鼠术后的恢复、生长发育和繁殖性能。目前，所使用的垫料主要有玉米秸垫料、刨花垫料。

（12）饲料配制

大小鼠的生产型饲料和维持型饲料必须严格按照国家标准，进行科学配制生产。每半年检测一次饲料的微生物指标和有效营养成分指标，保证饲料的质量。

1. 血清尿酸水平变化

模型组动物血清尿酸水平显著高于空白（表1）。

表1. 造模不同时间点血尿酸值对比

1. 诱导剂准备

肌苷(Inosine)：14125-10G，Lot#019K1124V，CAS：58-63-9，Sigma。

2. 实验动物

雄性恒河猴，体重6-8kg。

3. 给药

4只恒河猴分为4组：造模组和生理盐水对照组。造模组腹腔给与不同剂量的肌苷溶液造模。高剂量组（100mg/kg）、中剂量组（50mg/kg）、低剂量组（25mg/kg），给药体积为2ml/kg。

4. 模型分析指标

（1） 尿酸水平检测

在不同时间点取血约2ml，对比不同时间点血尿酸值，时间点设置为：0h（即造模前取空白对照血液）、造模后0.5h、1h、2h、4h、8h、24h。血样室温静置30min后，4000r/min离心10min，取血清立即冻存于-80摄氏度冰箱，待所有时间点取血清完成后按试剂盒方法（磷钨酸法）测定尿酸值。

高尿酸血症是由各种因素引起的尿酸产生过多、或肾脏排出尿酸减少、或两者兼有，致使血液中尿酸盐超过正常水平（6 毫克/100 毫升）的病理状态。高尿酸血症是痛风最重要的生化基础，并且与心血管疾病、免疫系统紊乱等密切相关，严重危害人类健康。目前临床上用于治疗高尿酸血症的药物以抑制尿酸生成和促进尿酸排泄为主。随着分子生物技术的快速发展和人们对高尿酸血症发病机制和遗传学认识的日益加深，新的治疗靶点不断被发现，新型治疗药物也相继问世。寻找更加合理、科学的药效学评价动物模型迫在眉睫。

以美国Biocryst公司研发的新型降血尿酸药物Ulodesine为例，其降尿酸机制主要通过抑制嘌呤核甘磷酸酶（PNP）活性，进而减少次黄嘌呤及黄嘌呤在体内的积累，以达到降低血尿酸的目的。随着该药二期临床终点的到达，PNP靶点得到了广泛关注。现有的抑制尿酸生成的市售药物均以黄嘌呤氧化酶（XO）为治疗靶点，而从尿酸生成途径来看，肌苷经PNP酶与XO酶的顺序水解作用与氧化作用形成尿酸。因此PNP酶位于XO酶的上游，通过补充嘌呤类药物（食物）建立的高血尿酸症动物模型并不适用于评价PNP酶抑制剂的降尿酸效果。经文献检索，有人曾对长期服用肌苷即次黄嘌呤核苷导致无症状高尿酸血症的临床事件进行了报道，但尚未有文献资料提及可用肌苷作为升高血尿酸的诱导剂来建立高尿酸血症的动物模型用于降尿酸药效评估。

灵长类尿酸排泄途径与人类相似。且经Ulodesine及非布索坦等尿酸合成抑制剂在该模型上降尿酸作用的验证，其不仅可用于评价PNP酶抑制剂的降尿酸作用，也适用于XO抑制剂降尿酸效果的评估。