肌苷致急性高尿酸血症树鼩模型

该模型通过长期观察普通狼疮小鼠模型，待其到40周龄时，检测其dsDNA等，结合皮肤症状变化，来确定慢性狼疮皮肤病模型的建立。目前国际上尚欠缺类似模型，为研究狼疮皮肤病发病机制提供了工具。

模型动物饲养在武汉大学人民医院动物房SPF级动物实验室，实验动物使用许可证SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特点

门采用专用净化密闭门并配备观察窗。单向走道呈顺时针走向设计。屏障系统内共有大鼠饲养室1间，小鼠饲养室3间，隔离观察室1间，实验准备室1间，洁物存放室1间，清洗消毒室1间。此外，屏障系统外配有监控室、机房和配电室等。

（2）设计参数

室内温度：20～26°C；日温差：≤4°C；相对湿度：40%～70%；换气次数：15～20次/h；气流速度：≤0．2m/s；压强梯度：20～50Pa；空气洁净度：7级；菌落数：≤3个/皿；氨浓度：≤14mg/m3；噪声：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；动物照度：15～20lx；昼夜明暗交替时间：12/12h。

（3）通风和空调系统

动物实验室采用全新风中央空调通风系统。空气经过初、中、三级过滤器后进入实验室内环境。

（4）照明系统

一更、淋浴、二更、气闸、清洁走道、洁物存放处、污物走道、缓冲间和清洗消毒间、动物饲养室、实验准备间、隔离观察室和功能实验室等安装有手动和自动开关，根据实际需要，调节控制室内照明灯。未启用房间、清洁走道、洁物存放处、污物走道等在每日中午12点和晚上8点开启紫外线灯照射1h。

（5）通讯系统

因为SPF级动物实验室的环境和设施具有特殊要求，人员进入后不能随意出入，而室内外的联系又十分重要，故室内各房间均安装内部电话机，按照房间顺序编排电话号码，各室内电话可相互连通，并均与监控室总机保持联系，保证实验室内外信息的及时沟通。

（6）监控系统

对SPF级动物实验室的出入口、走道、实验动物饲养室、功能操作室等重要位置均安装了可作270°旋转的摄像机，能够及时了解设施的运行状态；也能有效督促实验人员执行科学的操作规程，避免人为因素造成室内环境和设施的污染；并对整个实验期间的动物状态和反应进行观察，减少对动物的滋扰。

（7）供水系统

SPF级实验动物饮用水以纯净水为宜。本实验室采用管道供水，将处理后的纯净水用塑胶管道输送到屏障系统内实验准备室，设置接水槽，为实验动物供应灭菌的饮用水和屏障系统内用水。要经常更换和清洗输水管道，清洗笼具的用水添加适当比例的84消毒液。

（8）供电系统、警报系统和消防设施

SPF级动物实验室要求全天候不间断供风和供电，如果出现故障，不能及时发现和处理，就可能导致环境设施的污染、动物感染或死亡，造成严重后果。因此应对SPF级动物实验室使用独立稳定的供电系统，并配备有应急电源。在中央空调机房控制室安装风机故障警报系统，以便及时检修和维护，保证设施的安全运行。

（9）消毒灭菌设备

为防止外界物品进入SPF级动物实验室时所携带的细菌污染室内环境和造成动物交叉感染，按照不同物品的特性，进行紫外线照射消毒、渡槽消毒液消毒或专用的机动门真空灭菌器消毒。

（10）动物饲养笼具

饲养大、小鼠的笼具聚碳酸脂材料的塑胶笼具，具有高透明、耐高压、耐高温、耐酸碱等特点。通用的不锈钢笼具长、宽、高分别为40、30、20cm，适用于单笼饲养有特殊要求的实验动物，配有底盘和食槽，确保实验动物有充足的采食和活动空间，同时也保证室内环境的清洁。

（11）垫料的选择和使用

在使用塑胶垫料时，垫料是大小鼠直接接触的铺垫物，起到吸湿、保暖和造窝的作用。垫料的好坏直接影响到大小鼠术后的恢复、生长发育和繁殖性能。目前，所使用的垫料主要有玉米秸垫料、刨花垫料。

（12）饲料配制

大小鼠的生产型饲料和维持型饲料必须严格按照国家标准，进行科学配制生产。每半年检测一次饲料的微生物指标和有效营养成分指标，保证饲料的质量。

（1） 尿酸水平检测

给药后0h、0.5h、1h、2h、4h、8h尾静脉采血0.5ml于1.5ml EP管中，置于4℃冰箱放置1h，4℃、13000r离心15min，分离获得血清，磷钨酸法测定血清尿酸值，按照尿酸（UA）测定试剂盒说明书所描述的方法检测血清尿酸值。

五．表型信息

树鼩腹腔注射肌苷剂量300mg/kg和400mg/kg在给药后0.5h、1小时能使树鼩血清尿酸值升高，大于尿酸在血中的结晶浓度（416.5 μmol/L），2小时后血清尿酸值回落，300mg/kg和400mg/kg用药组与对照组在0.5h、1小时相比均有统计学差异（**P﹤0.01）；200mg/kg、250mg/kg剂量组与对照组对比尿酸值在升高不明显，与对照组在0.5h、1小时相比均没有统计学差异。综上所述，致使树鼩高尿酸血症肌苷的最佳剂量为300mg/kg～400mg/kg，该剂量组可形成稳定的急性高尿酸血症。结果见表1和图1。

1. 诱导剂准备

肌苷(Inosine)：Inosine,Sigma公司,批号:Lot#SLBP5740V,生理盐水溶解。给药途径:腹腔注射。

尿酸(UA)测定试剂盒,南京建成生物工程研究所产品,批号:20170502

2. 实验动物

中缅树鼩，滇西亚种树鼩，雌雄各半，80只，体重均在110g~150g范围内，年龄1-3岁，成年健康，由中国医学科学院医学生物学研究所提供，常规性饲养。饲养环境温度20℃～25℃，湿度40%～70%，自由饮水和采食。常规统一蒸糕饲料饲喂。

3. 给药

肌苷，Inosine，Sigma公司，批号：Lot #SLBP5740V，给药途径：腹腔注射。腹腔注射肌苷200mg/kg、250mg/kg、300mg/kg、400mg/kg，腹腔注射生理盐水作为对照。

尿酸是人体嘌呤代谢的终产物，主要有肝脏代谢产生，肾脏排泄出体外。高尿酸血症（hyperuricemia，HUA）是血液中由于肝脏代谢产生尿酸过多或肾脏排泄尿酸减少，或者两者兼有的原因产生血液中尿酸水平增高，甚至高于血尿酸产生结晶的饱和浓度（>7.0mg/dl，相当于416.5μmol/L）的病理状态。近年来，随着人民生活水平的提高，饮食结构和生活习惯的改变，高尿酸血症的患病率逐年增高，流行病学研究资料表明高尿酸血症和原发性痛风的发病呈上升趋势，在中国，已经有1.2亿的HUA人群，大约占总人口的10%，中老年及绝经后的妇女为高发人群，近年来发病年龄也呈年轻化的趋势。高尿酸血症与肥胖、高血压、高脂血症、冠状动脉粥样硬化性心脏病、胰岛素抵抗的发生密切相关，已成为识别代谢综合征的早期标志，这使人们对高尿酸血症产生了更多关注，并重新审视一些疾病的危险因素和防治策略，治疗和控制高尿酸血症已成为代谢性疾病治疗的重要组成部分。动物模型是研究疾病发病机理，寻找新型治疗药物的重要工具。

随着人们对高尿酸血症发病机制认识的日益加深，新的治疗靶点不断被发现，新型治疗药物也相继问世。寻找更加合理、科学的药效学评价动物模型迫在眉睫。

肌苷(Inosine)，也称为次黄苷、次黄嘌呤核苷等，是由次黄嘌呤于核糖结合而成的核苷类化合物，为人体的正常成分，是腺嘌呤的前体，能直接透过细胞膜进入体细胞，参与体内核酸代谢、能量代谢和蛋白质的合成。在嘌呤的从头合成中，肌苷酸(IMP)可以作为合成腺苷酸(AMP)和鸟苷酸(GMP)的前体，Inosine是体内ATP、辅酶A、核糖核酸及脱氧核糖核酸等生命分子基本组成，在体内转变为肌苷酸及三磷酸腺苷，并继而转换为其他多种核苷酸，同时肌苷也是尿酸合成的底物，肌苷位于尿酸代谢途径较前位置上。