长期高尿酸血症慢性肾损伤树鼩模型

该模型通过长期观察普通狼疮小鼠模型，待其到40周龄时，检测其dsDNA等，结合皮肤症状变化，来确定慢性狼疮皮肤病模型的建立。目前国际上尚欠缺类似模型，为研究狼疮皮肤病发病机制提供了工具。

模型动物饲养在武汉大学人民医院动物房SPF级动物实验室，实验动物使用许可证SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特点

门采用专用净化密闭门并配备观察窗。单向走道呈顺时针走向设计。屏障系统内共有大鼠饲养室1间，小鼠饲养室3间，隔离观察室1间，实验准备室1间，洁物存放室1间，清洗消毒室1间。此外，屏障系统外配有监控室、机房和配电室等。

（2）设计参数

室内温度：20～26°C；日温差：≤4°C；相对湿度：40%～70%；换气次数：15～20次/h；气流速度：≤0．2m/s；压强梯度：20～50Pa；空气洁净度：7级；菌落数：≤3个/皿；氨浓度：≤14mg/m3；噪声：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；动物照度：15～20lx；昼夜明暗交替时间：12/12h。

（3）通风和空调系统

动物实验室采用全新风中央空调通风系统。空气经过初、中、三级过滤器后进入实验室内环境。

（4）照明系统

一更、淋浴、二更、气闸、清洁走道、洁物存放处、污物走道、缓冲间和清洗消毒间、动物饲养室、实验准备间、隔离观察室和功能实验室等安装有手动和自动开关，根据实际需要，调节控制室内照明灯。未启用房间、清洁走道、洁物存放处、污物走道等在每日中午12点和晚上8点开启紫外线灯照射1h。

（5）通讯系统

因为SPF级动物实验室的环境和设施具有特殊要求，人员进入后不能随意出入，而室内外的联系又十分重要，故室内各房间均安装内部电话机，按照房间顺序编排电话号码，各室内电话可相互连通，并均与监控室总机保持联系，保证实验室内外信息的及时沟通。

（6）监控系统

对SPF级动物实验室的出入口、走道、实验动物饲养室、功能操作室等重要位置均安装了可作270°旋转的摄像机，能够及时了解设施的运行状态；也能有效督促实验人员执行科学的操作规程，避免人为因素造成室内环境和设施的污染；并对整个实验期间的动物状态和反应进行观察，减少对动物的滋扰。

（7）供水系统

SPF级实验动物饮用水以纯净水为宜。本实验室采用管道供水，将处理后的纯净水用塑胶管道输送到屏障系统内实验准备室，设置接水槽，为实验动物供应灭菌的饮用水和屏障系统内用水。要经常更换和清洗输水管道，清洗笼具的用水添加适当比例的84消毒液。

（8）供电系统、警报系统和消防设施

SPF级动物实验室要求全天候不间断供风和供电，如果出现故障，不能及时发现和处理，就可能导致环境设施的污染、动物感染或死亡，造成严重后果。因此应对SPF级动物实验室使用独立稳定的供电系统，并配备有应急电源。在中央空调机房控制室安装风机故障警报系统，以便及时检修和维护，保证设施的安全运行。

（9）消毒灭菌设备

为防止外界物品进入SPF级动物实验室时所携带的细菌污染室内环境和造成动物交叉感染，按照不同物品的特性，进行紫外线照射消毒、渡槽消毒液消毒或专用的机动门真空灭菌器消毒。

（10）动物饲养笼具

饲养大、小鼠的笼具聚碳酸脂材料的塑胶笼具，具有高透明、耐高压、耐高温、耐酸碱等特点。通用的不锈钢笼具长、宽、高分别为40、30、20cm，适用于单笼饲养有特殊要求的实验动物，配有底盘和食槽，确保实验动物有充足的采食和活动空间，同时也保证室内环境的清洁。

（11）垫料的选择和使用

在使用塑胶垫料时，垫料是大小鼠直接接触的铺垫物，起到吸湿、保暖和造窝的作用。垫料的好坏直接影响到大小鼠术后的恢复、生长发育和繁殖性能。目前，所使用的垫料主要有玉米秸垫料、刨花垫料。

（12）饲料配制

大小鼠的生产型饲料和维持型饲料必须严格按照国家标准，进行科学配制生产。每半年检测一次饲料的微生物指标和有效营养成分指标，保证饲料的质量。

1. 血清尿酸水平变化

给经磷钨酸法试剂盒检测，树鼩30天给药组、120天给药组ip注射给药氧嗪酸钾前后血清尿酸值均见明显升高，120天给药组与30天给药组相比较给药前后血清尿酸升高趋势比较接近。

2. 血清肌酐水平变化

经苦味酸比色法肌酐测试盒检测，树鼩30天给药组血清肌酐含量给药前后血清肌酐含量由73.10±18.71μmol/L变为75.74±7.98μmol/L，几乎没有变化（P=0.3565>0.05）无统计学意义,与对照组比较差异几乎没有（P>0.05）无统计学意义；120天给药组给药前后血清肌酐含量由62.45±14.63μmol/L升高至98.91±17.29μmol/L，（P=0.0443<0.05）有统计学意义，与对照组比较有所升高，（P=0.0049<0.05）有统计学意义。与30天给药组比较有所升高。结果见表2氧嗪酸钾致各剂量组血清肌酐变化

3. 低剂量氧嗪酸钾对树鼩肝脏、肾脏的病理学影响

用10％甲醛固定的树鼩肝脏、肾脏由昆明金域医学检验所做病理切片。由病理血诊断报告结果可知120天给药组肾小球毛细血管扩张、充血（1-5%）。部分肾小管上皮细胞空泡变性（5-10%）、水肿变性（5-10%），肾小管蛋白管 型（1-5%）。肾间质淋巴细胞浸润（1-5%）。结果见图1。

4.树鼩对照组、30天给药组、120天给药组肝脏、肾脏、小肠以GAPDH为内参基因LCN2、TGF-β、NF-κB、OAT1、OAT3基因表达水平的实时荧光定量检测

给药结束后，提取肾脏、肝脏、小肠RNA，逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR（Real-timefluorescence quantification，qPCR）检测LCN2、TGF-β、NF-ΚB、OAT1、OAT3在不同组别的肾脏中mRNA的表达变化，OAT1、OAT3在树鼩肝脏、小肠mRNA的表达变化。

结果显示给药组与对照组比较LCN2、TGF-β、OAT1在肾脏表达上调，OAT3、NF-κB变化不显著，肝脏的OAT1、OAT3mRNA表达下调，小肠的OAT1、OAT3mRNA表达变化不显著。本研究探索了LCN2、TGF-β、NF-ΚB、OAT1、OAT3基因的表达变化，为后续研究慢性高尿酸血症所引起的肝肾损伤的分子机制打下基础，建立动物模型。

成年滇西亚种树鼩，18只，雌雄各半，雌性体重范围为110g~135g，雄性体重范围为120g~150g。由中国医学科学院医学生物学研究所小动物实验部提供，常规性饲养。饲养环境温度20℃～25℃，湿度40%～70%，自由饮水和采食。

1. 诱导剂准备

氧嗪酸钾，Sigma公司产品，纯度≥97%。溶于羧甲基纤维素钠，制备成10mg/kg剂量。

2. 实验动物

成年滇西亚种树鼩，18只，雌雄各半，雌性体重范围为110g~135g，雄性体重范围为120g~150g。

3. 给药

将做过空白血清检测的18只树鼩随机分成对照组、30天给药组，120天给药组，各6只。雌雄各半，雌性体重均在110g~135g，雄性体重均在120g~150g。对照组每日腹腔注射（iP）1％羧甲基纤维素钠（CMC-Na）40mg/kg,给药时间为120天，给药组以同样剂量ip注射氧嗪酸钾（OA），给药时间分别为30天和120天。

4. 模型分析指标

（1） 尿酸水平检测

给药最后一天空腹给药1h后，尾静脉采血0.8ml于1.5mlEP管中，在4℃冰箱存放1h后提取血清，4℃、13000r/min 离心15min，取血清，磷钨酸法测定尿酸值。

（2） 肌酐水平检测

给药最后一天空腹给药1h后，尾静脉采血0.8ml于1.5mlEP管中，在4℃冰箱存放1h后提取血清，4℃、13000r/min 离心15min，取血清，苦味酸比色法肌酐测试盒检测肌酐值。

尿酸是体内嘌呤核苷酸的分解代谢终末产物，嘌呤核苷酸80%由体细胞产生，20%从食物中获取。尿酸在人体内主要通过肾脏和小肠排出体外。当嘌呤核苷酸类食物摄入过多或者肾脏排泄尿酸的功能降低，将导致血尿酸浓度高于正常范围，称为高尿酸血症(hyperuricem ia.HUA)。而长期高尿酸血症会通过氧化应激、炎症反应等途径引起肾间质纤维化和肾小球硬化，进而导致肾脏发生病理性改变。研究显示，血尿酸是肾功能异常的独立危险因素,其对肾功能的影响甚至超过尿蛋白量。随着血尿酸的升高，发生肾衰竭的概率也会大幅增高。反之，肾脏是体内调控尿酸排泄的重要器官，所以肾损伤又会阻碍尿酸的排泄，使得血尿酸浓度进一步升高，所以高尿酸血症和肾功能损害是相互作用的，在临床上表现为痛风性性肾病、急性高尿酸肾病、尿酸结石等。可见研究血尿酸升高导肾损伤的发病因素对于治疗肾损伤疾病和高尿酸血症都至关重要。