糖耐量异常KKAy小鼠模型

该模型通过长期观察普通狼疮小鼠模型，待其到40周龄时，检测其dsDNA等，结合皮肤症状变化，来确定慢性狼疮皮肤病模型的建立。目前国际上尚欠缺类似模型，为研究狼疮皮肤病发病机制提供了工具。

模型动物饲养在武汉大学人民医院动物房SPF级动物实验室，实验动物使用许可证SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特点

门采用专用净化密闭门并配备观察窗。单向走道呈顺时针走向设计。屏障系统内共有大鼠饲养室1间，小鼠饲养室3间，隔离观察室1间，实验准备室1间，洁物存放室1间，清洗消毒室1间。此外，屏障系统外配有监控室、机房和配电室等。

（2）设计参数

室内温度：20～26°C；日温差：≤4°C；相对湿度：40%～70%；换气次数：15～20次/h；气流速度：≤0．2m/s；压强梯度：20～50Pa；空气洁净度：7级；菌落数：≤3个/皿；氨浓度：≤14mg/m3；噪声：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；动物照度：15～20lx；昼夜明暗交替时间：12/12h。

（3）通风和空调系统

动物实验室采用全新风中央空调通风系统。空气经过初、中、三级过滤器后进入实验室内环境。

（4）照明系统

一更、淋浴、二更、气闸、清洁走道、洁物存放处、污物走道、缓冲间和清洗消毒间、动物饲养室、实验准备间、隔离观察室和功能实验室等安装有手动和自动开关，根据实际需要，调节控制室内照明灯。未启用房间、清洁走道、洁物存放处、污物走道等在每日中午12点和晚上8点开启紫外线灯照射1h。

（5）通讯系统

因为SPF级动物实验室的环境和设施具有特殊要求，人员进入后不能随意出入，而室内外的联系又十分重要，故室内各房间均安装内部电话机，按照房间顺序编排电话号码，各室内电话可相互连通，并均与监控室总机保持联系，保证实验室内外信息的及时沟通。

（6）监控系统

对SPF级动物实验室的出入口、走道、实验动物饲养室、功能操作室等重要位置均安装了可作270°旋转的摄像机，能够及时了解设施的运行状态；也能有效督促实验人员执行科学的操作规程，避免人为因素造成室内环境和设施的污染；并对整个实验期间的动物状态和反应进行观察，减少对动物的滋扰。

（7）供水系统

SPF级实验动物饮用水以纯净水为宜。本实验室采用管道供水，将处理后的纯净水用塑胶管道输送到屏障系统内实验准备室，设置接水槽，为实验动物供应灭菌的饮用水和屏障系统内用水。要经常更换和清洗输水管道，清洗笼具的用水添加适当比例的84消毒液。

（8）供电系统、警报系统和消防设施

SPF级动物实验室要求全天候不间断供风和供电，如果出现故障，不能及时发现和处理，就可能导致环境设施的污染、动物感染或死亡，造成严重后果。因此应对SPF级动物实验室使用独立稳定的供电系统，并配备有应急电源。在中央空调机房控制室安装风机故障警报系统，以便及时检修和维护，保证设施的安全运行。

（9）消毒灭菌设备

为防止外界物品进入SPF级动物实验室时所携带的细菌污染室内环境和造成动物交叉感染，按照不同物品的特性，进行紫外线照射消毒、渡槽消毒液消毒或专用的机动门真空灭菌器消毒。

（10）动物饲养笼具

饲养大、小鼠的笼具聚碳酸脂材料的塑胶笼具，具有高透明、耐高压、耐高温、耐酸碱等特点。通用的不锈钢笼具长、宽、高分别为40、30、20cm，适用于单笼饲养有特殊要求的实验动物，配有底盘和食槽，确保实验动物有充足的采食和活动空间，同时也保证室内环境的清洁。

（11）垫料的选择和使用

在使用塑胶垫料时，垫料是大小鼠直接接触的铺垫物，起到吸湿、保暖和造窝的作用。垫料的好坏直接影响到大小鼠术后的恢复、生长发育和繁殖性能。目前，所使用的垫料主要有玉米秸垫料、刨花垫料。

（12）饲料配制

大小鼠的生产型饲料和维持型饲料必须严格按照国家标准，进行科学配制生产。每半年检测一次饲料的微生物指标和有效营养成分指标，保证饲料的质量。

1.动物生化特征及体型观察

糖耐量异常KKAy小鼠（IGT-KKAy）与正常小鼠（Nor）相比，具有明显的中心性肥胖体征（图A）；具有空腹血糖升高，其口服葡萄糖负荷后血糖升高异常等特征（图B）；并且伴有高甘油三酯血症和高胆固醇症（图C），其摄食和饮水量较正常动物一定程度增加（图D）。

2.胰岛功能及胰岛素抵抗特征

如图E所示，通过高葡萄糖钳夹实验研究发现，糖耐量异常的KKAy小鼠在钳夹稳态期，其GIR值显著降低，表明其胰岛素分泌功能一定程度减低；高胰岛素正糖钳夹结果显示：在稳态期，IGT-KKAy小鼠的GIR值显著低于正常组，表明该模型也具有一定程度的胰岛素抵抗状态。

1.实验动物准备

雌性KKAy小鼠，8周龄，给予高脂饲料（脂肪含量45%）喂养2-3周后，采用OGTT实验监测其口服葡萄糖负荷后血糖上升状态。

2.模型分析指标

高脂饲料喂养后，KKAy小鼠空腹血糖轻度升高，OGTT中葡萄糖负荷后各时间点血糖值较正常动物显著升高，且伴有轻度血脂升高。

健康人接受葡萄糖刺激后，胰岛素呈双相分泌，1相分泌发生在糖刺激后5至10 min，血胰岛素水平急剧升高并快速降低，随后进入2相分泌，并随着糖刺激的存在而持续发生。胰岛素1相分泌减少是引起糖耐量异常的主要因素。临床中部分患者空腹血糖正常，但餐后血糖明显升高，即糖耐量异常，被认为处于糖尿病前期。如果不加以控制，那么会增加发生糖尿病的风险。

糖耐量异常的诊断是指空腹血糖，没有达到糖尿病的诊断标准，即在7mmol/L以下。同时OGTT糖耐量试验2小时，静脉血浆血糖大于或者等于7.8mmol/L，且要小于11.1mmol/L就是糖耐量异常。是糖正常人向糖尿病的过度状态。