病毒核酸检测试剂盒的原理是什么? 《病毒学检验》大学复习知识点总结习题答案

不幸的孩子，是没有用过好试剂盒做实验吧。你下面说的那些，从提取rna，消化基因组，反转录，加定量pcr的整个进程，假设用qiagen的盒子，2h多一点就能拿到结果了。

如今鉴定病毒的盒子，应该是进一步优化过的，差不多2小说搞定。

我国主要的几种检测试剂盒都是基于RT-PCR原理。由于需求检测的病毒样本浓度有高有低，高的容易检测，低浓度就会漏掉。所以PCR的方法就把病毒基因扩增很多倍，到达可以检测出来的浓度。基本操作如下： 01 搜集咽拭子等病毒样本，经过试剂打碎维护病毒的蛋白质壳子，萃取病毒RNA。一方面是萃取，另一反面，打碎之后就没有了感染性，相对平安一些。

02 由于这次新冠肺炎是单链RNA病毒，所以要先转换成cDNA。这个可以类比像是视频文件,mp4,rmvb,avi这些都是罕见格式，同一个视频不同格式，意思都一样，可以相互转换。

03 惯例PCR反响，加热到94℃把DNA拉链拉开，之后再55℃-60℃让引物，就是拉链扣区分套在两条拉链上，再升温到72℃让拉链自己复制，用左拉链做模板造一个右拉链，用右拉链做模板造一个左拉链。这样折腾一次为一个循环，RNA数量翻一倍。之后再折腾25-30次。这样就算很大批的病毒这个时分也显现出来了。

PCR操作方法 这个方法很主流，也很经典。但是这个操作步骤太多，而且每次都是微量，手一抖就完蛋了。另外引物（就是拉链扣）的质量也是关键，假设复制错了拉链，那么整个检测前功尽弃。 当然还无机器清洗的效果，假设上一个阳性样本检测之后，没有洗洁净设备，下一个原本阴性患者能够就会假阳性被误诊。中国大三甲医院自己都有PCR检测和人员，流程比拟熟练。美国欧洲很多医院偏专科，综合性超大型少一些，原本很多检验都是委托外包第三方实验室。遇到疫情，着急出结果自己上手，能够有手法不熟练的状况。假设又正好运用了某些中国的无证试剂盒厂商出品的无证试剂，多重误差叠加，准确度就会崩盘。 那么雅培检测试剂盒和国际主流试剂盒有啥不一样呢？ 这次雅培的五分钟检测试剂盒用的是一个完全不同的反响体系，简称RPA（重组酶聚合酶扩增），也叫做恒温扩增技术。中心就是用三个主要原料：单链核酸重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶，在一个恒定温度下37度到42度都可以，直接把DNA套成一个环，在本地施任务业，直接套用引物，复制目的DNA。 RPA技术优势很清楚： 01 特别快，传统PCR要45分钟，由于要重复升温降温。RPA由于是恒温，所以只需求3-10分钟。

02 灵敏度高，由于是高度定向扩增，所以样品即使有点儿杂质也OK，免除了前处置环节，尽量多的保管了样本。

03 温度控制要求低，普通是加热到40℃，但是在紧急状况下，贴在人身上用人体的体温36℃、37℃也没效果。甚至在室温25℃，也是可以运转，就是慢点儿，要等一个小时而已。

04 适用性强，面对RNA病毒，直接在试剂里参与逆转录酶就好，一锅端。

益处是很多，但是毕竟RPA也只能设计两个引物，假设设计不好，能够就会错误的把其他病毒错检成新冠。但是雅培果真行业大佬，设计巧夺天工，对照实验中基本面对少量其他病毒，都没有发生错误。

反过去，RPA由于太灵敏，之前的样本有一点儿残留在机器里，下一个样本就不准了。所以雅培的设计是彻底的全封锁一次性试剂盒。机器和样本不直接接触，只要激光扫码这一块。一切的试剂盒全部都是一次性运用，并且外部封锁样本处置。这样就防止了样品交叉污染，由此可以释放检测才干，纵情地检测更低浓度的病毒。因此可以释放检测才干，纵情去检测低浓度病毒。

好东西值得吹嘘。毕竟一次只能检测一个，关于穷人和偏远地域是OK。但是关于大规模检测的中央，比如说美国方舱医院，PCR方案短期内还是没法被替代。 引文： 1, Abbott RealTime SARS-CoV-2 For use under an Emergency Use Authorization (EUA) Only http://www.fda.gov/media/136258/download 2，ID NOW™ http://www.alere.com/en/home/product-details/id-now.html 3，重组酶聚合酶扩增技术研讨停顿 http://html.rhhz.net/SWJSTB/html/2016-6-47.htm 靠谱的安康医疗科普节目