化妆品功效评价方法之皮肤生理学检测 化妆品功效性评价代理公司

皮肤生理学检测（Cutaneous Biological Test，CBT）是一种皮肤精细生理目的检测体系，即采用皮肤胶带粘贴（Tape Stripping）的方法采样，经过显微镜观察、成分剖析、免疫学检测、多组学技术，从皮肤表观生理学到组织、细胞再到蛋白、基因水平对胶带上采集的皮肤样本停止多角度、多层面的原位测定，依据相应皮肤生理学目的的变化，深化开掘肌肤效果的成因和机制，为迷信研讨皮肤以及化装品的成效评价提供集体化、精准和片面的人体皮肤大数据支持。

一、角质层检测

角质层是表皮的*外层，由5-15层细胞核和细胞器消逝的角质细胞及细胞间脂质构成。20世纪70年代，Peter Elias教授笼统的将角质层的结构称之为“砖墙结构”。

图1 角质层砖墙结构

角质层采样是用涂有黏性资料的胶带、圆盘或许玻片粘贴皮肤，作用于表皮角质层的黏附力可使鳞屑零落，从而观察角质层的生理和病理学变化。可经过观察角质鳞屑和角质细胞的形状来剖析皮肤的枯燥或受损状况。

二、脂质检测

角质层细胞间脂质由大约50%神经酰胺、25%胆固醇、15%游离脂肪酸和一些主要的脂质组成。研讨证明，皮肤脂质的分泌进程及主要组成成分如甘油三酯、角鲨烯、神经酰胺、胆固醇、游离脂肪酸等的结构、含量或比例的变化，都会影响皮肤屏障功用。

目前提取皮肤外表脂质*常用的方法是脂带法，比拟常用的胶带是Corneofix®。将胶带采集的脂质溶解于一定比例的环己烷/乙醇溶液中，脂质提取物在氮气条件下枯燥，经过自动化高能色谱剖析仪和气相色谱仪定量剖析角质层脂质的详细成分。可经过火析各脂质成分的比例来研讨皮肤屏障受损或恢复状况。

三、微生物检测

皮肤外表栖居着众多微生物，包括细菌、真菌、病毒、衣原体和某些原虫等，这些共同构成了皮肤的微生物群（分为常驻菌群与暂住菌群），外部环境、皮肤微生物群以及宿主皮肤构成了皮肤微生态。

常驻菌群是指临时定居在皮肤，并且可以自我恢复的菌群，菌群数量和种类因集体、环境的不同而不同，它们属于人类的共生体，可以协助皮肤抵抗外界抚慰，是皮肤菌群的主要成员，常驻菌一旦脱离特定的环境，就会形成皮肤疾病。常驻细菌主要有葡萄球菌、微球菌、丙酸杆菌、棒状杆菌、不动杆菌，常驻真菌有念珠菌、球拟酵母菌、表皮癣菌、小孢子菌、毛癣菌等。

暂驻菌是指经过接触外界环境而取得的一类微生物，包括金黄色葡萄球菌、溶血链球菌及肠球菌等，它们是惹起皮肤感染的主要病原菌。

确定皮肤中存在何种细菌的传统方法是运用拭子取样。采样技术的关键：运用湿润的棉签，施加动摇的压力，以及摩擦的分歧性（在采样区域30 s内来回擦拭50次）。经过研讨皮肤外表菌群的变化，可以了解微生物与皮肤效果的关系，并针对性治疗。例如痤疮丙酸杆菌可将甘油三酯水解为游离脂肪酸，这些游离脂肪酸被氧化构成过氧化脂质激活角质构成细胞的脂氧合酶，使IL-6等炎症因子分泌添加，促发并减轻炎症反响。

四、功用组检测

在对功用组皮肤目的停止检测时大多运用D-Squame®粘贴盘停止采样，采样后对胶带直接停止染色，经过图像剖析停止物质定量，或采用高效液相色谱法检测胶带上相应物质的含量。功用组皮肤目的：丙二醛、维生素E、自然保湿因子、黑素细胞等。

D-Squame

参考资料：

[1] 马雪. 化装品成效评价（Ⅻ）-皮肤生理学检测在化装品成效评价中的运用. 日用化学工业. 2020.

[2] 董银卯. 皮肤表观生理学. 化学工业出版社.

[3] 崔乐. 维持皮肤屏障研讨停顿—脂质的分泌及组成. 中国皮肤性病学杂志. 2016.

[4] 王茜. 皮肤微生态与化装品研发. 日用化学工业. 2017.

敏理性皮肤（Sensitive Skin，SS）特指皮肤在生理或病理条件下发作的一种高反响形状，主要发作于面部，临床表现为遭到物理、化学、肉体等要素抚慰时皮肤易出现灼热、刺痛、瘙痒及紧绷感等客观症状，伴或不伴红斑、鳞屑、毛细血管扩张等客观体征。

一、体外实验

1、透明质酸酶抑制实验

透明质酸酶（HAase）是透明质酸（HA）的特异性裂解酶，抑制HAase的活性可保证HA含量和功用正常。透明质酸酶抑制实验是*典型的抗敏活性评价体外方法，以透明质酸酶抑制率为目的评价物质的抗过敏活性，透明质酸酶抑制率越大则抗过敏活性越强。

2、自在基肃清实验

线粒体在电子传递的进程中发生的自在基会攻击细胞膜、蛋白质甚至DNA，招致细胞的衰老甚至死亡，抑制自在基活性可以有效缓解由外界抚慰发生的过量自在基所招致的细胞结构功用退步，进而维护皮肤的正常屏障结构。自在基包括：DPPH·、羟基自在基（·OH）、超氧阴离子自在基、一氧化氮自在基（NO·）等。

3、红细胞溶血实验

红细胞溶血实验（RBC hemolysis test system）由欧洲替代方法验证中心（ECVAM）树立，*后用于替代Draize兔眼实验对化合物眼抚慰性的标识、筛查或机制研讨，其原理在于测定从红细胞中漏出的血红蛋白的量来评价细胞膜的损伤水平，血红蛋白漏出量越多，损伤越大。

此外，还可以经过研讨神经酰胺、AQP-3（水通道蛋白-3）、FLG（丝聚蛋白）、Caspase-14（半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-14）、炎症因子等的表达来评价抗敏成效。

二、植物实验

除斑贴实验以外，多为抑制炎症乃至过敏反响，这方面的研讨不只限于皮肤，而且深化到外部器官和机体免疫系统。

1、豚鼠皮肤瘙痒模型止痒实验

2、豚鼠皮肤脱水模型的皮肤修复实验

3、主动皮肤过敏模型抗敏实验

2002年11月7日欧洲议会与欧盟理事会在布鲁塞尔达成协议，决议“从2009年起在欧盟范围内制止运用植物停止化装品毒性和过敏性实验，2013年制止运用植物停止化装品原料的平安性评价；逐渐不允许其成员国从本国出口和销售进举植物实验的化装品。”

三、人体实验

大局部抗敏成效化装品原料及产品的开发环节中，人体实验依然是必不可少的一局部，普通为激起斑贴实验。此外人体实验中还可以停止角质层水分含量实验、皮肤红斑指数测试、皮肤其他生理指数测试以及皮肤厚度、皮肤外表结构的改动，从而判别皮肤的敏理性状况。

1、客观评价

包括视觉评价（专家或医生评价）和受试者自我评价（调查询卷）。

2、半客观评价

罕见的有乳酸刺痛实验和辣椒素实验等。

乳酸刺痛实验：在室温下，将5％或10％的乳酸水溶液50μL涂抹于鼻唇沟及恣意一正面颊，区分在0，2.5，5和8 min时讯问受试者的自觉症状，按4分法停止评分（0分为没有刺痛感，1分为轻度刺痛，2分为中度刺痛，3分为重度刺痛）。然后将两次分数相加，总分≥3分者为乳酸刺痛反响阳性。

辣椒素实验：将直径为0.8 cm的两层滤纸放置于一侧鼻唇沟外约1 cm处及恣意一正面颊，将含量为0.1％的辣椒素50μL置于滤纸上，讯问受试者的觉得（1分为勉强可以发觉，2分轻度可以发觉，3分为中度可以发觉，4分为重度可以发觉，5分为疼痛）。假设受试者的灼痛觉得继续时间>30 s，且水平≥3分者为阳性。

SLS皮肤抚慰实验：将一定浓度的SLS置于斑试器内，局部封包于受试部位，24 h后去除斑试器并于去除斑试器后特定时间观察受试部位皮肤变化，停止I临床评分及无创仪器检测。

3、客观评价

客观评价法是经过仪器对受试者运用化装品前后的皮肤形状参数停止采集、样本剖析和统计剖析，进而对化装品停止成效评价的一种方法。

经皮水分流失（TEWL）、皮肤厚度和密度、水分含量、油脂分泌量、酸碱度（pH值）、红斑指数（Erythema index，EI）、色素指数（Melanin index，MI）及弹性（R2／R5／R7）等基础生理目的，可以在一定水平上将其屏障功用停止量化表征。

END

参考资料：

[1] 樊琳娜. 敏感皮肤成因解析及化装品抗敏活性评价停顿. 日用化学工业. 2015.

[2] 王欢. 化装品成效评价(V)-舒缓成效宣称的迷信支持. 日用化学工业. 2018.

[3] 董银卯. 化装品配方设计7步. 化学工业出版社.

化装品成效评价项目

项目背景：以后我国化装品产业飞速开展,化装品品牌百花齐放，化装品技术质量逐渐提高。与此同时化装品监管法规不时完善，化装品消费者需求日益提升，化装品平安效果亟需品牌厂家注重。

项目运用

1、 法规要求

化装品监视管理条例（2021.01.01）

化装品注册人，备案人对化装品的质量平安和成效宣称担任。

2、 成效定量剖析

3、 原料开发

4、 配方挑选

5、 销售支持

6、 学术运用

项目列表

出口及国产化装品备案专业效劳和优势

☑ 一站式效劳——专业、高效、省时、省心。

☑ 专业团队——高素质专业技术队伍，熟懂法规、研发、质控等各个环节，满足企业的各种需求。

☑ 专属客服——专属客服为客户处置，央求、受理，进度跟踪，任务协调报揭发放以及财务结算等进程中的各种效果，协助客户浪费时间和本钱。

☑ 威望——洞悉行业方向，紧跟行业政策，协助客户有效应对法规更新和市场变化。